Выпускная квалификационная работа
|
Скачать 0.61 Mb.
|
|
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Клиническая характеристика пациентов Было проведено обследование 34 пациентов (18 женщин и 16 мужчин) в возрасте от 31 до 60 лет (средний возраст составил 49,1 лет) с ХГП различной степени тяжести без тяжелой сопутствующей патологии, а также пациентов без патологии пародонта, которые находились на амбулаторном лечении в СПб ГБУЗ «Городская стоматологическая поликлиника № 33». В соответствии с поставленными задачами было сформировано 2 группы:
Критерии включения пациентов в исследование: достоверный диагноз ХГП; информированное согласие больного. Критерии исключения пациентов из исследования: курильщики; наличие ортодонтических аппаратов; тяжелая сопутствующая патология внутренних органов с функциональной недостаточностью, сахарный диабет, опухоли любой локализации; ВИЧ-инфекция, активный туберкулез; отказ больного от обследования. Всем пациентам было проведено обследование, предусматривающее оценку стоматологического статуса, полученные данные занесены в карту обследования стоматологического пациента (Приложение 1). 2.2 Клинико-рентгенологическое обследование пациентов Клиническое обследование пациентов было проведено по общепринятой схеме, которая включала сбор сведений из жизни пациента, внешний осмотр и осмотр полости рта. Также была проведена оценка интенсивности кариеса постоянных зубов, определен уровень гигиены ротовой полости, состояние тканей пародонта у обследуемого. Использован комплекс основных и дополнительных методов исследования.
1 класс. Рецессия в пределах свободной десны. Утрата десны и/или кости в межзубных промежутках отсутствует 2 класс. Рецессия в пределах прикрепленной десны. Утрата десны и/или кости в межзубных промежутках не отсутствует 3 класс. К рецессии 2-го класса добавляется поражение аппроксимальной поверхности 4класс. Наблюдается циркулярная потеря десны и кости в межзубных промежутках
1-я степень - зуб смещается относительно оси, но смещение не превышает 1мм; 2-я степень - зуб смещается на 1-2мм в вестибуло-оральном направлении, при этом функция зуба не нарушается; 3-я степень - подвижность резко выражена, зуб подвижен не только в вестибуло-оральном направлении, но и вертикально, нарушается функция зуба;
Следует уточнить, что реальное дно кармана или борозды невозможно определить с помощью зонда, потому как при воспаленной десне зондом затрагивается соединительный эпителий; при давлении 2 МПа зонд уже достигает соединительной ткани. При легкой степени тяжести ХГП клиническая потеря прикрепления составляет 1-2мм, при средней – 3-4мм, при тяжелой – 5мм и более;
Используется для определения толщины зубного налета в пришеечной области исследуемых зубов. Исследование проводят на всех зубах или на отдельной группе зубов (1.6, 3.6, 1.1, 3.1, 2.4, 4.4). Определение проводится с помощью зеркала, зонда и воздуха для высушивания (пистолет вода-воздух), окрашивание не применяется. Ортопедические конструкции и композитные реставрации не обследуют. В каждом зубе определяют 4 поверхности: вестибулярную, язычную, дистальную и медиальную. После полного высушивания поверхности зуба воздухом налет определяют, проводя кончиком зонда в придесневой области. Для оценки используют следующие цифровые критерии: 0 — зубной налет в пришеечной области отсутствует; 1 — слой зубного налета на свободном десневом крае или в пришеечной области зуба определяется только при движении зонда по поверхности; 2 — зубной налет в десневом кармане, на поверхности десны и/или зуба, визуализируется без помощи зонда; 3 — зубной налет находится в избытке в области зубодесневого кармана и/или десневого края, а также прилегающей поверхности зуба. Индекс определяется как частное от деления суммы показателей на общее число обследованных зубов.
Индекс OHI-S представляет собой двойной индекс, так как состоит из двух частей: первая составляющая – это индекс зубного налета – DI-S; и вторая составляющая – это индекс зубного камня – CI-S. Исследование проводят на вестибулярной поверхности 3.1, 1.1, 1.6, 2.6 зубов и язычной поверхности 3.6, 4.6 зубов. Индекс зубного налета DI-S оценивается следующим образом: 0 — зубной налет отсутствует; 1 — зубной налет покрывает не более 1/3 коронковой части зуба; 2 — зубной налет покрывает от 1/3 до 2/3 коронковой части зуба; 3 — зубного налет покрывает более 2/3 коронковой части зуба. Расчет производится по формуле:  ,где С – оценка зубного налета; n - количество оценок. Индекс зубного камня CI-S определяют аналогично индексу DI-S, с учетом следующих оценок: 0 — зубной камень отсутствует; 1 — наддесневой камень покрывает менее 1/3 коронковой части зуба; 2 —наддесневой камень покрывает от 1/3 до 2/3 коронковой части зуба или имеются отдельные частицы поддесневого камня; 3 - наддесневой камень покрывает более 2/3 коронковой части зуба. Наличие поддесневого зубного камня оценивают баллами 2 и 3. Индекс зубного камня CI-S вычисляется по формуле:  ,где C - оценка зубного камня; n - количество оценок. Гигиенический индекс OHI-S рассчитывается по формуле: OHI-S = (DI-S)+(CI-S). Интерпретация результатов: 0-1,2 — индекс гигиены низкий, гигиена полости рта хорошая; 1,3-3,0 — индекс гигиены средний, гигиена удовлетворительная; 3,1-6,0 балла — индекс гигиены высокий, гигиена неудовлетворительная; 6,0 баллов и более — индекс гигиены очень высокий, гигиена плохая.
Оценивание индекса РМА проводится согласно следующим критериям: 0 — воспаление десны отсутствует; 1 — воспален десневой сосочек (Р); 2 — воспалена маргинальная десна (М); 3 — воспалена альвеолярная десна (А). Индекс РМА рассчитывают по формуле: PMA =  Интерпретация результатов: 30% и менее — гингивит легкой степени тяжести; 31—60 % — гингивит средней степени тяжести; 61% и выше — гингивит тяжелой степени тяжести.
Это комплексный пародонтальный индекс нуждаемости в лечении. Применяется для оценки состояния тканей пародонта у взрослых, для планирования профилактических и лечебных мероприятий, определения потребности в стоматологическом персонале, анализа и совершенствования лечебно-профилактических программ. С целью определения показателя используется специальный пародонтальный зонд с шариком диаметром 0,5мм на конце зонда и черной полоской на расстоянии 3,5мм от кончика зонда. У пациентов исследуют ткани пародонта в области шести групп зубов (1.7/1.6, 1.1, 2.6/2.7, 3.7/3.6, 3.1, 4.6/4.7) на верхней и нижней челюсти. При отсутствии зубов, поддающихся оценке, в том же секстанте оцениваются все сохранившиеся зубы. Критерии оценки: 0 — здоровые ткани пародонта, признаки воспаления отсутствуют; 1 — после зондирования выявляется кровоточивость десны; 2 — зондом определяется поддесневой зубной камень (черная полоска зонда не погружается в десневой карман); 3 — определяется карман 4-5мм; 4 — определяется карман более 6мм. Также проводилась оценка ортопантомограмм и результатов компьютерной томографии по следующим критериям:
2.3 Микробиологические методы исследования 2.3.1 Забор материала Забор материала из пародонтальных карманов у пациентов основной и контрольной групп для микробиологических исследований проводили с помощью стерильных бумажных эндодонтических абсорберов AbsorbentPaperPoints, фирмы Euronda (размер №25), которые вводили в пародонтальные карманы пациента на 10 секунд. После забора материала забора материала эндодонтические абсорберы помещались в стерильные пробирки типа Eppendorf и хранились при -200С. До взятия материала пациенты не применяли никаких полосканий с лекарственными средствами и не проводили чистку зубов. 2.3.2 Конструирование олигонуклеотидных праймеров Конструирование, анализ олигонуклеотидных праймеров и определение температуры плавления праймеров осуществляли с помощью компьютерных программ Primer 3 и OLIGO 4.0 (Таблица 2.3.2). Таблица 2.3.2 Олигонуклеотидные праймеры
2.3.3 Выделение тотальной ДНК из исходного биологического материала Для выделения ДНК из биологического материала использовали тест-систему «ДНК-экспресс» (Литех, Россия). В пробирки типа Eppendorf с эндодонтическими абсорберами добавляли по 120 мкл реагента, после чего содержимое пробирок тщательно перемешивали на вортексе (Vortex, Biosan) в течение 10 секунд. Абсорберы извлекали из пробирок, затем пробирки помещали в твердотельный термостат и инкубировали при t = 98°С в течение 20 минут. После инкубации пробирки центрифугировали при скорости 13000 об/мин в течение 15 секунд. Полученный супернатант использовали в дальнейшем при постановке полимеразной цепной реакции. 2.3.4 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод ферментативного получения амплификаций (большого количества копий) исследуемых фрагментов ДНК путем повторных циклов репликации и денатурации (разделения цепи ДНК на отдельные нити). При этом происходит копирование только исследуемого участка ДНК, поскольку только этот участок соответствует заданным условиям и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце (http://doctorspb.ru/articles.php?article_id=1049). К 0,25 мкг геномной ДНК добавляли 10 мкмолей каждого из специфических праймеров, фланкирующих исследуемую последовательность, буфер с магнием для полимеразы, по 0,2 мМ каждого из 4 дезоксирибонуклеотидтрифосфатов, объем доводили водой до 25 мкл. Добавляли 0,4 мкл термостабильной ДНК полимеразы. На поверхность жидкости наслаивали 40 мкл минерального масла. Пробирки помещали в амплификатор (Терцик, Россия). Смесь инкубировали при t = 94оС в течение 3 минут. Прибор программировали по активному регулированию температуры в растворе: цикл денатурации t = 94oС на 15 секунд, цикл отжига праймеров на 15 секунд, цикл синтеза ДНК t = 72oС на 20 секунд. Последовательность таких циклов повторялась 35 раз. После чего смесь инкубировали при t = 72oС в течение 5 минут. Олигонуклеотидные праймеры, использованные в работе, приведены в таблице 2.3.2. 2.3.5 Электрофорез фрагментов ДНК Электрофорез ДНК проводили в 1,0% агарозном геле в горизонтальном аппарате «WideMini-SubCell GT Cell- 170-4468» (BioRad, США) с использованием ТАЕ буфера (Thermo Scientific, Германия). Время электрофореза – 40 мин, напряжение устанавливали 120 В при площади геля 150 см2. Для визуализации ДНК в ультрафиолетовых лучах в гель добавляли раствор бромистого этидия (0,5 мкг/мл). Визуализацию результатов электрофореза проводили в ультрафиолетовом свете с использованием системы видеозахвата «VersaDoc MP 4000» (BioRad, США) и системы видеозахвата, использующей цифровой фотоаппарат (Olimpus, Япония) и компьютерную программу «QuantityOne» (США). Для расчета молекулярных масс исследуемых фрагментов ДНК использовали ДНК-маркер «100 bpPlus DNA ladder». 2.4 Компьютерный анализ Статистическая обработка включала вычисление параметров средних величин и их отклонений в программе Microsoft Excel. Для визуализации результатов исследования были построены диаграммы. ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Результаты клинических исследований Анализ результатов полученных в ходе клинического исследования показал, что все обследованные пациенты с ХГП предъявляли жалобы на кровоточивость при чистке зубов (100%), а также на отек и воспаление десен (100%). Неприятный запах из полости рта стал одной из жалоб у половины пациентов (50%). Некоторые пациенты жаловались на попадание пищи между зубами, зуд и жжение в деснах, подвижность зубов. Данные результаты представлены в таблице 3.1.1. Таблица 3.1.1 Жалобы обследованных пациентов с ХГП
Анализ жалоб по подгруппам пациентов с ХГП различной степени тяжести представлен в таблице 3.1.2. Таблица 3.1.2 Жалобы обследованных пациентов с ХГП различной степени тяжести
Продолжение таблицы 3.1.2
При анализе жалоб пациентов с ХГП различной степени тяжести выяснено, что процент предъявленных жалоб увеличивался с развитием заболевания (рис.3.1.1). Рис. 3.1.1 Жалобы пациентов с ХГП различной степени тяжести При сборе анамнеза было установлено, что в основной группе причину развития ХГП 13 пациентов связывают с наследственностью, а 14 – не знают о причинах развития ХГП. Наличие вредных привычек все обследованные пациенты отрицали (100%). При оценке полученных данных по гигиеническим навыкам пациентов (таблица 3.1.3), было выяснено, что большинство из них (96%) чистит зубы 1 раз в день ручной зубной щеткой и пастой, и только 1 пациент чистит зубы 2 раза в день зубной щеткой и пастой. Таблица 3.1.3 Навыки индивидуальной гигиены полости рта обследованных пациентов
При осмотре полости рта кариес зубов и его осложнения были выявлены у всех пациентов с ХГП. Показатель КПУ составил 18,3±2,0, что говорит о очень высоком уровне интенсивности кариеса. Значения индекса КПУ для каждой из основных подгрупп представлены в таблице 3.1.4. Таблица 3.1.4 Значения индекса КПУ у пациентов с ХГП различной степени тяжести
При обследовании пациентов оценивали показатель клинической потери пародонтального прикрепления, который у подгруппы пациентов с ХГП легкой степени тяжести составил 1,4±0,4 мм, средней степени – 3,2±0,5 мм и 5,3±0,8мм – у пациентов с ХГП тяжелой степени. При анализе экссудации из пародонтальных карманов у пациентов с ХГП различной степени было обнаружено, что при легкой степени ХГП экссудация была выявлена в 14,3±2,7 пародонтальных карманах, при средней степени – в 16,8±1,5 пародонтальных карманах, при тяжелой степени – в 19,0±1,7 пародонтальных карманах пациентов с ХГП. Анализируя подвижность зубов по степени их смещения, мы обнаружили, что при легкой степени тяжести ХГП подвижность зубов отсутствовала, при средней степени тяжести – у 44% пациентов имелась подвижность 1 степени в среднем 5,3±0,4 зубов, а при тяжелой степени ХГП – у всех пациентов наблюдалась подвижность зубов 1-3 степени (средняя подвижность зубов у пациента составила 1,6±0,1) в среднем 10,4±2,2 зубов. Рецессия десны 4 класса по Миллеру была выявлена у всех пациентов с ХГП. При проведении индексной оценки установлено, что индекс OHI-S у обследованных пациентов с ХГП составил 4,2±1,2, Silness-Loe – 2,2±0,6, РМА – 54,8±16,5 (%) , CPITN – 2,8±0,6 (таблица 3.1.5). Таблица 3.1.5 Значения индексов гигиены и состояния тканей пародонта у пациентов с ХГП
Наблюдалась возрастающая динамика значений индексов гигиены у обследованных пациентов с ХГП в зависимости от степени тяжести заболевания, что продемонстрировано в таблице 3.1.6. Таблица 3.1.6 Значения индексов гигиены у пациентов с ХГП различной степени тяжести
Следовательно, развитие ХГП тесно связано с уровнем гигиены полости рта пациента, который у всех обследованных пациентов с ХГП является неудовлетворительным. 3.2 Результаты рентгенологического исследования При оценке ортопантомограмм (Приложение 3, 4, 5) и результатов компьютерной томографии у пациентов с ХГП было выявлено разрушение компактной пластинки альвеолярного гребня на всем протяжении зубного ряда. Также отмечалась различная степень деструкции кости, что соответствовало тяжести ХГП обследованного пациента. Резорбция костной ткани вызывала образование внутрикостных пародонтальных карманов, которые обнаружены у всех пациентов с ХГП. Среднее количество костных карманов, а также среднее количество периапикальных изменений на 1 пациента были выражены в равной степени у всех пациентов основной группы, что представлено в таблице 3.2.1. Таблица 3.2.1 Распределение пациентов по среднему количеству внутрикостных карманов и периапикальных изменений на 1 пациента (М±m)
Согласно результатам, полученным при анализе деструкции костной ткани, компактной пластинки альвеолярного гребня, количества костных карманов и периапикальных изменений, обнаруженных при оценке данных рентгенологического исследования, следует, что изменения костной ткани у обследованных пациентов с ХГП соответствуют тяжести заболевания. 3.3 Результаты микробиологического исследования С помощью метода ПЦР–скрининга были проведены исследования на наличие в пародонтальных карманах пациентов основной и контрольной групп четырех пародонтопатогенов, ассоциированных с агрессивным развитием пародонтита. В таблице 9 представлены результаты ПЦР – скрининга на пародонтопатогены у пациентов с ХГП. Таблица 3.3.1 Выявленные пародонтопатогены у пациентов с ХГП различной степени тяжести методом ПЦР-диагностики
Продолжение таблицы 3.3.1
На рисунке 3.3.1 представлено определение Porphyromonas gingivalis и Tannerella forsythia методом ПЦР в образцах 1-8, полученных из пародонтальных карманов пациентов с ХГП.  Рис. 3.3.1 ДНК-фрагменты после ПЦР и разделения в 1% агарозном геле Обозначения: 1, 11 – ДНК-маркер (100 – 1500 пн); 2-9 - P.gingivalis в образцах 1-8; 10 – отрицательный контроль на P. gingivalis; 12-19 - T. forsythia в образцах 1, 4, 5, 7, 8; 19 – отрицательный контроль на T. forsythia Пародонтопатогены красного (Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola) и оранжевого (Prevotella intermedia) комплексов были обнаружены в пародонтальных карманах у 96% пациентов с ХГП различной степенью тяжести. В контрольной группе пациентов пародонтопатогены не были выявлены. Анализ результатов ПЦР показал следующее распределение по частоте встречаемости основных пародонтопатогенных микроорганизмов у пациентов ХГП: P. gingivalis (67%, 18 пациентов), T. forsythia (41%, 11 пациентов), T. denticola (48%, 13 пациентов), P. intermedia (22%, 6 пациентов), что отражено на рисунке 3.3.2.  Рис. 3.3.2 Частота встречаемости основных пародонтопатогенных микроорганизмов у пациентов c хроническим генерализованным пародонтитом (%) |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 |
Пояснительная записка выпускная квалификационная работа бакалавра |
 |
Выпускная квалификационная работа Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования |
|
Выпускная квалификационная работа Объясняются ли инвестиции нефтяных компаний стремлением к повышению эффективности? 27 |
|
Выпускная квалификационная работа Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования |
|
Выпускная квалификационная работа Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования |
|
Выпускная квалификационная работа Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования |
|
Выпускная квалификационная работа Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования |
|
Выпускная квалификационная работа Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования |
|
Выпускная квалификационная работа Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования |
|
Выпускная квалификационная работа Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования |
|
Технологии в деятельности социальных организаций выпускная квалификационная... Теоретические аспекты и правовые основы pr-деятельности в социальной работе 6 |
|
Выпускная квалификационная работа Влияние информационных технологий на развитие социально-культурного сервиса и туризма |
|
Выпускная квалификационная работа магистра Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования |
|
Выпускная квалификационная работа Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
|
Выпускная квалификационная работа На тему: «Разработка комплекса мероприятий по обеспечению информационной безопасности на предприятии» |
|
Выпускная квалификационная работа бакалавра Теоретические основы формирования кредитной политики коммерческого банка |