Руководств о к практическим занятиям по биохимии

Скачать 2.6 Mb.

Название	Руководств о к практическим занятиям по биохимии
страница	6/31
Тип	Учебное пособие

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Учебное пособие

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 31

1.3. Количественное определение белка биуретовым методом. Построение калибровочных кривых

Определение концентрации белка проводят в научных учреждениях при изучении, выделении и очистке белков; в промышленности в процессе получения ферментов, пищевых белков, белковых лекарственных препаратов; в медицинских биохимических лабораториях для оценки состояния печени и почек.

Существует много разных методов количественного определения белков. Среди них широкое распространение получили колориметрические методы, основанные на способности белков давать окрашенные комплексы с рядом реактивов (цветные реакции). Среди этих методов наиболее распространены биуретовый метод и его модификация (метод Лоури^¹).
Цель работы

Освоить работу фотоэлектроколориметра (ФЭК). Научиться строить стандартные калибровочные кривые. Определить содержание белка в пробе с неизвестной концентрацией.
Принцип метода

Биуретовый метод основан на образовании окрашенного в фиолетовый цвет комплекса пептидных связей белка с ионами двухвалентной меди в щелочной среде (биуретовая реакция). Интенсивность развивающейся окраски раствора прямо пропорциональна концентрации белка и определяется фотометрически. Для количественного определения белка измеряют интенсивность окраски стандартных растворов белка с известной концентрацией (величину оптической плотности Dст). По полученным данным строят график зависимости оптической плотности окрашенных растворов от концентрации в них белка (стандартную калибровочную кривую). На оси ординат всегда откладывают величину D как функцию от задаваемых значений (см. рисунок).

Измеряют оптическую плотность Dх окрашенного раствора с неизвестной концентрацией белка и по стандартной кривой определяют в нем концентрацию белка. В качестве стандартного белка обычно используют раствор сывороточного альбумина.
Выполнение работы

Реактивы, мл	Контроль	Стандартный белок 10 мг/мл	Стандартный белок 20 мг/мл	Стандартный белок 30 мг/мл	Неизвестный белок Х мг/мл
Раствор сывороточного альбумина, мл	—	0,2	0,2	0,2	0,2
Н₂О, мл	0,2	—	—	—	—
Биуретовый реактив*, мл	5	5	5	5	5
Перемешивают и инкубируют 30 минут при комнатной температуре
Фотометрируют против Н₂О ( = 545 нм, толщина кюветы 1 см). D₅₄₅
Dст – Dк; Dх – Dк

*Биуретовый реактив: исходный концентрат (медь сернокислая – 120 ммоль/л, калий иодистый – 300 ммоль/л, калий-натрий виннокислый – 320 ммоль/л, гидроксид натрия –3 моль/л) разводят перед работой 1:19

Оформление работы

В рабочей тетради записать и заполнить таблицу; построить стандартную кривую и определить по ней концентрацию белка в неизвестном растворе.

Выводы

Тестовые задания по теме: «Аминокислоты и простые белки»
1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

Имидазольное кольцо гистидина содержит 1 атом азота.
N-концевая аминокислота в дипептиде гистидиллизин - гистидин.
С-концевая аминокислота в трипептиде серилпролилглицин - глицин.
Альбумины сыворотки крови выполняют транспортную функцию.
Пролин содержит имино-группу.
Аспарагиновая кислота является производным янтарной кислоты.
Все ли пептиды дают положительную биуретовую реакцию?
Зависит ли интенсивность окраски вещества в растворе от его концентрации?
Можно ли разделить белки методом высаливания, используя сернокислую медь (сульфат меди)?
Встречаются ли в организме человека аминокислоты, которые не входят в состав белков?
Участвует ли ε-NH₂-группа лизина в образовании пептидной связи в белках?
Обладают ли радикалы серина и валина гидрофильными свойствами?

2) Выбрать один правильный ответ

Аминокислота с незаряженным радикалом:

треонин

лизин

аргинин

гистидин

глутаминовая кислота

Для определения оптической плотности синего раствора используют светофильтр:

голубой

желтый

красный

зеленый

синий

3) Найти соответствие

АМК	Химическая группа в составе радикалов
метионин серин аргинин цистеин аспарагин	А. гидроксильная Б. амидная В. тиометильная Г. гуанидиловая Д. сульфгидрильная

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 31

Похожие:

	Руководство к практическим занятиям по биохимии Р 82 Руководство к практическим занятиям по биохимии: Учебное пособие/ Под ред. И. П. Смирновой. М.: Оргсервис-2000, 2008. 101 с		Методические указания к практическим занятиям по дисциплине «Экономика организации» Экономика организации [Текст]: методические указания к практическим занятиям для студентов очной формы обучения по специальностям...
	Учебное пособие к практическим занятиям по курсу «Фармацевтическое товароведение» Учебное пособие предназначено для подготовки студентов к лабораторно-практическим занятиям и включает название темы, цель занятия,...		Литература для студентов медицинских вузов (авторы) сборник тестов по биохимии В сборнике представлены тесты по биохимии, составленные в полном соответствии с теоретическим материалом по курсу «Биохимии», рекомендованному...
	Методические указания к практическим занятиям по общей, неорганической... Методические указания к практическим занятиям по общей, неорганической химии и органической предназначены для студентов специальности...		Методические рекомендации по практическим занятиям для студентов... Направляющие системы электросвязи: методические рекомендации по практическим занятиям для студентов специальностей 210400. 62, 210406....
	Материалы для подготовки к практическим занятиям по дисциплине «медицина катастроф» Для подготовки к занятиям студентов необходимо рекомендовать учебник Сахно или его электронную версию		Руководство к практическим занятиям учащихся химико-биологических... Белоусов Д. Л. Руководство к практическим занятиям учащихся химико-биологических классов по разделу «Общая генетика». Троицк, 2009....
	Руководство к практическим занятиям по психологии психических состояний... П 78 член-корр. Рао, д псх н., проф. В. И. Панов, д псх н., проф. А. Б. Леонова		Методические рекомендации к практическим занятиям по дисциплине «Программирование... Методические рекомендации к практическим занятиям по учебной дисциплине «Программирование для автоматизированного оборудования»
	Руководство к лабораторным и практическим занятиям по заводской технологии лекарств		Методические рекомендации к практическим занятиям по фармакологии для студентов
	«судебная медицина и психиатрия» Рекомендации по подготовке к семинарским (практическим) занятиям		Методические разработки к практическим занятиям по дерматовенерологии,... ...
	Методические материалы к практическим занятиям по дисциплине «современные... Методические материалы к практическим занятиям по дисциплине «современные методы социологического исследования» для магистрантов		Учебная программа дисциплины 3 Введение Рекомендации по подготовке к семинарским (практическим) занятиям

Руководство, инструкция по применению