Методическое пособие Рекомендовано Методическим Советом по аспирантуре Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Оренбургский государственный медицинский университет»

Скачать 1.11 Mb.

Название	Методическое пособие Рекомендовано Методическим Советом по аспирантуре Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Оренбургский государственный медицинский университет»
страница	16/16
Тип	Методическое пособие

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Методическое пособие

1 ... 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Умерщвление и вскрытие лабораторных животных

В лабораторной практике приняты способы умерщвления, которые характеризуются простотой приемов и вызывают быструю, безболезненную смерть животного. Мышей, крыс, морских свинок помещают в стеклянную, плотно закрывающуюся банку с кусочком ваты, пропитанным хлороформом или эфиром. Животные засыпают и гибнут в течение 3—5 минут. Кроликов умерщвляют посредством воздушной эмболии. Для этого в краевую вену уха по направлению к его основанию вводят иглу шприца. Появление капельки крови свидетельствует о том, что игла находится в вене. После этого иглу соединяют с пустым 10-граммовым шприцем, поршень которого вытянут до конца. При надавливании на поршень в кровеносную систему животного поступает находящийся в цилиндре шприца дух, вызывая эмболию и быструю смерть.

Вскрытие животных

Трупы лабораторных животных вскрывают с целью выяснения причин гибели, выделения введенного возбудителя, выявления механизма распространения микробов в организме и места их локализации, изучения патологоанатомических изменений, наступающих в результате перенесенной инфекции. Вскрытие трупов животных производят стерильными инструментами, соблюдая правила асептики.

На столе должны находиться стакан, наполненный до половины спиртом, стерильные ножницы, скальпель, анатомические и хирургические пинцеты, бактериальная петля, стерильные чашки Петри, пробирки и чашки с питательными средами, стерильные пастеровские пипетки, предметные стекла, стерильный изотонический раствор хлорида натрия, банка с дезинфицирующим раствором, ватные тампоны, спички и горелки (спиртовая и газовая). Вскрытие трупов следует производить таким образом, чтобы предупредить внесение микроорганизмов с поверхности в глубину тканей, а также перенос микробов из одного органа в другой. С этой целью рекомендуется вскрывать животных в агональном состоянии, усыпив их эфиром, или тотчас после наступления смерти, так как в ближайшие часы после нее проницаемость тканей нарушается, и бактерии из одного органа могут проникнуть в другой. Особую опасность в этом отношении представляет кишечник, содержимое которого изобилует микробами.

Труп животного брюшком кверху кладут на деревянную доску или лоток с пластинкой застывшего парафина, растягивают пинцетом все 4 лапы и в таком положении фиксируют их булавками или небольшими острыми гвоздиками к поверхности дерева или парафина. Грудь и брюшко протирают ватой, смоченной 5% раствором карболовой кислоты или 5% раствором хлорамина, или, лучше, смачивают спиртом и поджигают шерсть, чтобы содержащиеся на ней микробы, в том числе спороносные палочки, не разлетались и не загрязняли стерильные инструменты и органы вскрытия трупа. В процессе вскрытия придерживаются общепринятого порядка. Сначала исследуют наружные покровы и подкожную клетчатку, затем проводят вскрытие, исследование и взятие материала из органов грудной полости, а в последнюю очередь вскрытие, исследование и взятие материала из органов брюшной полости.

Обработанную кожу разрезают по средней линии живота протяженностью от симфиза до грудино-ключичного сочленения. На уровне передних и задних лап делают боковые надрезы. Кожные лоскуты отпрепаровывают от подкожной клетчатки и отворачивают в стороны, прикалывая булавками к доске.

В протоколе вскрытия отмечают состояние подкожной клетчатки и лимфатических узлов в паху и подмышечных впадинах. Подкожная клетчатка может быть развита сильно, слабо или умеренно. Подмышечные и паховые узлы обнаруживаются легко. При осмотре узлов обращают внимание на их величину, форму и цвет. Для бактериологического исследования лимфатические узлы раздавливают стерильным пинцетом и погружают в жидкую питательную среду или втирают в поверхность плотной питательной среды.

Сменив или простерилизовав использованные для вскрытия кожных покровов инструменты, приступают к вскрытию грудной клетки. Грудину, захваченную пинцетом, слегка приподнимают, делают под ней небольшой надрез, вводят в него браншу ножниц и перерезают ребра вначале с одной, а затем с другой стороны. Если в грудной полости есть экссудат, из него делают мазки и посев. Вновь сменив ножницы или протерев их ватой, смоченной спиртом, разрезают перикард, обнажая поверхность сердца. Накаливают на пламени горелки бранши пинцета или скальпель, прижигают поверхность сердца, затем стерильным пинцетом оттягивают кверху ушко правого предсердия и после этого через прижженное место вводят в полость желудочка или предсердия капилляр пастеровской пипетки. Кровь, поднявшуюся по капилляру пипетки, засевают в питательную среду.

Далее приступают к осмотру органов, расположенных в грудной полости, регистрируя в протоколе имеющиеся в них изменения, например наличие экссудата в полости плевры, абсцессы, гиперемию (багрово-красное окрашивание) или, наоборот, ишемию (малокровие) в легких. Кусочки легкого с выявленными в нем изменениями вырезают для бактериологического исследования.

После этого, сменив инструменты, переходят к исследованию органов брюшной полости. Передний листок брюшины вскрывают ножницами. При наличии экссудата в брюшной полости делают из него мазок и производят посев в питательную среду. Затем осматривают печень, селезенку, почки, отмечая цвет, величину органов, характеризуя их консистенцию (нормальная, дряблая, уплотненная, хрупкая) и имеющиеся очаги поражения, например абсцессы.

При локализации инфекционного процесса в желудочно-кишечном тракте делают посев содержимого желудка и кишечника, набирая его в пастеровскую пипетку через прижженную желудочную и кишечную стенки. Таким же образом для посева берут экссудат, содержимое абсцессов, желчного и мочевого пузыря.

Из паренхиматозных органов (печень, почки, селезенка) взятие материала и засев его производят одним из следующих способов.

У стерильной пастеровской пипетки обламывают кончик и проводят ее через пламя горелки. Затем капилляром пипетки прокалывают прижженный участок исследуемого органа и насасывают в нее тканевую жидкость, которую засевают в питательную среду. Пипетки после использования опускают в банку с дезинфицирующим раствором.
Прижженную поверхность органа надрезают стерильным скальпелем и из глубины надреза соскабливают бактериальной петлей небольшое количество материала, которое затем вносят в питательную среду.
На прижженной поверхности органа делают надрез, остроконечными ножницами из глубины его вырезают маленький кусочек, раздавливают между браншами пинцета и опускают в жидкую питательную среду или срезом кусочка делают отпечатки на поверхности плотной питательной среды.

Изменения, обнаруженные при вскрытии трупа, а также результаты бактериологического исследования вносят в протокол вскрытия и бактериологического исследования трупного материала, составленный примерно по такому образцу:

Вид лабораторного животного, взятого в опыт.
Время заражения (месяц, число, час).
Материал, примененный для заражения (взвесь микробов с плотной питательной среды, бульонная культура, взвесь патологического материала и т. д.).
Время гибели животного (месяц, число, час).
Изменения, обнаруженные при вскрытии животного в месте введения заразного материала, состояние подкожной клетчатки, лимфатических узлов; изменения, найденные во внутренних органах.
Вид микроба, выделенного из трупного материала, его основные морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства.

После вскрытия трупы животных складывают в металлические бачки с плотно закрывающимися крышками и засыпают сухой хлорной известью. Трупы мелких лабораторных животных можно заливать раствором различных дезинфицирующих веществ: 5% раствором карболовой кислоты, 3—5% мыльно-карболовым раствором, 3—5% раствором хлорамина. Трупы животных, погибших от заражения споровыми формами микробов, заливают хлорно-известковым молоком или 5—10% осветленным раствором хлорной извести. В дезинфицирующем веществе трупы животных хранят до момента их сжигания.

Определение вирулентности микробов

Вирулентность — биологическое свойство микроба, характеризующее степень его патогенности в момент исследования. В отличие от патогенности вирулентность является не видовым, а индивидуальным признаком микроба, который может усиливаться или ослабляться вплоть до полного исчезновения под влиянием различных факторов внешней среды.

Для характеристики вирулентности пользуются количественными показателями, определяющими способность исследуемой микробной культуры вызывать гибель искусственно зараженных ею подопытных животных. Изучение вирулентности бывает сопряжено с рядом трудностей, так как она определяется не только комплексом культурно-морфологических, токсигенных и биологических свойств микроба, но и резистентностью микроорганизма, подверженной большим колебаниям в связи с видом, возрастом животных, режимом их питания, температурой внешней среды, а также способом заражения, принятым в опыте. Поэтому при установлении вирулентности микроба очень важно вести исследование, точно соблюдая стандартность всех условий опыта.

Для определения вирулентности микробных культур чаще всего используют белых мышей. В том случае, когда белые мыши невосприимчивы к исследуемому возбудителю заболевания, пользуются другими видами животных: крысами, морскими свинками или кроликами.

Для определения вирулентности применяют молодую культуру микроба, так как старые культуры содержат большое количество мертвых клеток.

Культуру микроба для заражения выращивают на мясо-пептонном агаре или другой плотной питательной среде, так как бульон, представляя собой сложный белковый субстрат, небезразличен для животного организма и может извращать результаты опыта. Исследуемую культуру микроба, выращенную на скошенном мясо-пептонном агаре, смывают изотоническим раствором хлорида натрия и стандартизуют по оптическому стандарту так, чтобы в 1 мл этого раствора содержалось определенное количество микробных тел. В зависимости от вида культуры, патогенности ее для животных, взятых в опыт, а также от цели и задач исследования количество микробных тел, содержащееся в 1 мл взвеси, может колебаться от единиц до миллиардов. В тех случаях, когда по каким-либо причинам получить агаровую культуру невозможно, пользуются суточной бульонной культурой. Для определения минимальной летальной дозы из бульонной культуры готовят ряд последовательных десятикратных разведений: 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000 и т.д.

Исследуемую взвесь бактерий вводят различными способами: внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, подкожно, интраназально—в зависимости от целей и задач исследования.

Отстандартизованную взвесь микробов в изотоническом растворе хлорида натрия, а также разведения бульонной культуры готовят с таким расчетом, чтобы различные дозы микроба, используемые в опыте, содержались в одинаковых объемах жидкости.

Каждую дозу культуры вводят одновременно нескольким животным. При определении минимальной смертельной дозы учитывают и отмечают в протоколе опыта следующие данные:

количество микробов, введенных в организм животного;
способ их введения;
масса тела зараженного животного;
сроки гибели после заражения.

Степень вирулентности чаще всего характеризуют тремя следующими показателями:

Минимальная смертельная доза Dlm (Dosis letalis minima), т.e. наименьшая доза микробов, которая при определенном способе заражения, в определенных условиях опыта вызывает гибель около 95% подопытных животных.
Наименьшая безусловно смертельная доза Dll (Dosis lerie letalis) — наименьшая доза микробов, являющаяся смертельной для всех 100% животных, взятых в опыт.
Средняя смертельная доза микробов LD₅₀ (Dosis letalis 50%)—доза микробов, вызывающая гибель 50% зараженных животных.

Показатель LD₅₀ позволяет получить более достоверные результаты, и потому он чаще других используется в практике экспериментальных исследований.

В отличие от Dlm и Dll, определявшихся непосредственно по результатам опыта, LD₅₀ вычисляется путем довольно сложных математических расчетов. Более прост метод Кербера, в котором простота расчета удачно сочетается с достаточно высокой точностью получаемых результатов.

Определение токсигенности микробов

В патологии человека большую роль играют токсигенные микроорганизмы, к которым относятся возбудители ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции, дифтерии, а также некоторые штаммы бактерий дизентерии Григорьев -Шига, стафилококка и стрептококка и некоторые другие.

Экзотоксины, вырабатываемые различными представителями этой группы микробов, обладают резко выраженной токсичностью, высокой избирательностью действия с поражением отдельных органов и тканей и способностью при парентеральном введении в организм вызывать образование антител—антитоксинов, способных нейтрализовать соответствующие им экзотоксины.

Продуцируемые в процессе жизнедеятельности микроба экзотоксины легко диффундируют из клетки в окружающую их питательную среду. Бульонную культуру микроба выдерживают в термостате в течение 2—3 недель для накопления в ней токсина, затем фильтруют через бактериальный фильтр. Получаемый при этом прозрачный фильтрат содержит неразведенный токсин.

Токсигенность микробов определяют по тому же принципу, что и вирулентность. Единицами измерения токсигенности, как и вирулентности, являются минимальная смертельная доза (Dlm) и средняя смертельная доза (LD₅₀). Для определения Dlm и LD₅₀ фильтрат бульонной культуры разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия в сотни, тысячи и миллионы раз. Каждую дозу токсина испытывают одновременно на 6—10 животных. Для постановки проб подбирают животных, наиболее чувствительных к исследуемому токсину. Например, дифтерийный токсин титруют на морских свинках, столбнячный токсин—на мышах. При учете полученных результатов в протоколе опыта отмечают дозу введенного токсина, способ его введения, массу тела животного и время наступления его гибели после введения токсина.

1 ... 8 9 10 11 12 13 14 15 16

	Попов А. А., Глухов П. П., Луппа Г. М., Попова О. А. Летний образовательный... Рекомендовано к печати Ученым советом института системных проектов государственного бюджетного образовательного учреждения высшего...		1 Центр тяжести 11 Лабораторная работа №11 Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Адамовский сельскохозяйственный техникум – филиал Федерального государственного...
	О центре информационных технологий Центр информационных технологий (далее — цит) является структурным подразделением федерального государственного бюджетного образовательного...		Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения... Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования
	Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения... Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования		Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения... Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования
	Отчет о самообследовании деятельности федерального государственного... Деятельности федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования		Методическое пособие по организации досуга молодежи в рамках туристско-краеведческой... Рецензент: Выдрина Г. А. кандидат философских наук, доцент кафедры менеджмента Федерального государственного бюджетного образовательного...
	О студенческом городке федерального государственного бюджетного образовательного учреждения Студенческое общежитие (далее – студенческое общежитие) федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего...		Учебное пособие по чтению Для студентов заочного отделения 080502, 080507 Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный...
	П. Ф. Еромасова (колледж) филиал Федерального государственного бюджетного... П. Ф. Еромасова (колледж) – филиал Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования		П. Ф. Еромасова (колледж) филиал Федерального государственного бюджетного... П. Ф. Еромасова (колледж) – филиал Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования
	П. Ф. Еромасова (колледж) филиал Федерального государственного бюджетного... П. Ф. Еромасова (колледж) – филиал Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования		Отчет о самообследовании деятельности Федерального государственного... ...
	Программа стратегического развития федерального государственного... Адыгейский государственный университет как классический университет и главный образовательный, культурный, научный и интеллектуальный...		Ульяновский государственный технический университет Положением о закупке товаров, работ, услуг федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования...

Умерщвление и вскрытие лабораторных животных

Вскрытие животных

Определение вирулентности микробов

Определение токсигенности микробов

Похожие: