Микробиология, вирусология микробиология полости рта

Скачать 4.26 Mb.

Название	Микробиология, вирусология микробиология полости рта
страница	9/31
Тип	Рабочая учебная программа

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Рабочая учебная программа

1 ... 5 6 7 8 9 10 11 12 ... 31

Вопросы для самоконтроля

Свойства антигенов.
Получение и использование антигенов для диагностики и профилактики.
Свойства антител.
Получение и использование сывороток для диагностики и лечения.

Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Реакции агглютинации.

Цель: Разобрать механизм реакций агглютинации и освоить методики постановки реакций линейной и пассивной агглютинации.

Мотивация: Знание механизмов и методик постановки реакций агглютинации необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций.

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: иммунные реакции; титр антител; реакции агглютинации;

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

Механизм реакций агглютинации.
Виды реакций агглютинации (ориентировочная, линейная, ускоренная).
Реакция пассивной гемагглютинации.
Реакция торможения гемагглютинации.
Реакция агглютинации с флюоресцирующими антителами.
Использование реакций агглютинации.

Диагностические критерии серодиагностики

• Диагностический титр - величина титра антител в сыворотке крови к конкретному возбудителю, превышение которой расценивается как диагностический признак.

• Нарастание титра антител - не менее чем 4^х - кратное увеличение титра антител к данному возбудителю, наблюдающееся при исследовании парных сывороток (сывороток взятых у больного с интервалом 7-10 дней). Более достоверный критерий серодиагностики.

Реакция агглютинации (РА)

Принцип метода:

При взаимодействии антител и корпускулярных антигенов (микробные или другие клетки) в растворе электролита происходит склеивание (агглютинация) антигенов.

Ингредиенты:

1. Антитела - находятся в сыворотке обследуемого человека. Сыворотку разводят физиологическим раствором от 1:40 до 1:1600

2. Антигены - диагностикумы. Добавляют в каждое разведение.

Электролит - 0,9% раствор NaCl.

«+» феномен агглютинации - образование хлопьев.

«-» феномен агглютинации - равномерная муть.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

Принцип метода:

Реакция, в которой происходит склеивание эритроцитов с нагруженными на них антигенами (эритроцитарный диагностикум) или антителами (иммунодиагностикум) в присутствии электролита. Эритроциты в РНГА служат "укрупнителями" для придания молекулярным антигенам корпускулярности.

Инградиенты:

1. Антитела - находятся в сыворотке обследуемого человека. Сыворотку разводят физиологическим раствором от 1:10 до 1:160

2. Антигены – эритроцитарный диагностикум. Добавляют в каждое разведение.

3. Электролит - 0,9% раствор NaCl.

«+» феномен РНГА - "зонтик"

«-» феномен РНГА - "пуговка"

ПРОТОКОЛЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ

Реакция линейной агглютинации с одним антигеном

Оснащение:

7 пробирок, диагностикум, физраствор, сыворотка больного в разведении 1/100, пипетки

Схема постановки реакции

Разведения	1/100	1/200	1/400	1/800	1/1600	Контроль АТ	КонтрольАГ
Физ.р-р	-	1,0	1,0	1,0	1,0	-	1,0
Сыворотка больного 1/100	1,0	1,0	По 1,0			1,0	-
Диагностикум	2к	2к	2к	2к	2к	-	2к

Выдержать в термостате при 37°С 2 часа, затем при комнатной температуре - 18 часов.

Учет результатов:

++++ полная агглютинация, жидкость прозрачная, большой осадок

+++ большой осадок, жидкость мутная

++ незначительней осадок, жидкость мутная

+ взвесь равномерно мутная, отсутствует осадок.

Результат:

.

Вывод: При постановке реакции линейной агглютинации с___________________________антигеном титр антител в сыворотке больного составил__________________, что свидетельсьвует о ______________________________________________________________.
Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

Оснащение:

Пластина для РПГА, эритроцитарный диагностикум, сыворотка больного в разведении 1/10, пипетки, физраствор.

Схема постановки реакции

Разведение сыворотки	1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	Контроль антигена
Физ.р-р	-	2к	2к	2к	2к	2к
Сыворотка больного в разведении 1/10	2к	2к	2к	2к	2к	-
Сенсибилизированные эритроциты	2к	2к	2к	2к	2к	2к

Реакция протекает при комнатной температуре. Учет реакции через 30-40 минут:

++++ осадок эритроцитов в виде зонтика

+++ на фоне склеившихся эритроцитов кольцо из осадка

++ выраженная агглютинация и ясно видимый осадок эритроцитов

+ и - оценивается как сомнительный результат

Результат: _____________________________________________________________________________

Вывод: При постановке реакции пассивной гемагглютинации с___________________________антигеном титр антител в сыворотке больного составил______________________________, что свидетельствует о ___________________________________________________________.

Вопросы для самоконтроля

Механизм реакций агглютинации.
Виды реакций агглютинации

3. Использование реакций агглютинации

Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Реакция преципитации.

Цель: Разобрать механизм реакций преципитации и освоить методики постановки реакций кольцепреципитации и осадочной реакции преципитации.

Мотивация: Знание механизмов и методик постановки реакций преципитации необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций.

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: преципитины; преципитиногены; реакции преципитации; токсины; антитоксины; реакции флокуляции

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

Свойства преципитинов и преципитиногенов.
Механизм реакции преципитации.
Виды реакций преципитации (кольцепреципитация, осадочные, преципитации в агаре). Практическое использование реакций преципитации.
Свойства токсинов и антитоксинов.
Механизм реакции нейтрализации токсинов антитоксинами.
Реакция флокуляции. Практическое использование реакций нейтрализации токсина антитоксином.

ПРОТОКОЛЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ
Реакция кольцепреципитации

Оснащение:

Набор микропробирок, физраствор, преципитирующая сыворотка, преципитиноген в разведении 1/1000, пипетки

Схема постановки реакции

Разведение антигена	1/1000	1/2000	1/3000	1/4000	1/5000
Физ.раствор	-	0,2	0,4	0,6	0,8
Преципитиноген	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2
Преципитирующая сыворотка	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0

Наслоить каждое разведение преципитиногена на преципитирующую сыворотку в объеме 0,2 мл.

Учет реакции производится в течение 10 минут после наслаивания антигена по образованию мутного кольца преципитата.

Разведения антигена	1/1000	1/2000	1/3000	1/4000	1/5000
Время появления кольца в минутах

Вывод: При постановке реакции кольцепреципитации с___________________________

антигеном титр преципитиногена составил__________________.
Осадочная реакция Кана.

Оснащение:

Пробирки, пипетки, физраствор, антиген Кана, исследуемая сыворотка.

Схема постановки реакции

В чистую сухую пробирку наливают I мл антигена, в другую -I мл физ.раствора, который затем вливают в антиген ( I пробирка ) и, не дожидаясь отекания последних капель, быстро переливают смесь из одной пробирки в другую 6-7 раз, приготовленный антиген оставляют при комнатной температуре на 5-10 минут.

В чистую пробирку микропипеткой наливают 0,025 мл готового антигена, добавляют в него 0,15 мл испытуемой сыворотки. В контрольной пробирке к 0,025 мл антигена вместо сыворотки добавляют 0,15 мл физ.р-ра. Смеси в пробирках встряхивают в течение 3 мин., после чего каждую пробирку наливают по 0,5 мл физ.р-ра и производят учет результатов. Для этого пробирки слегка наклоняют и в тонком слое жидкости рассматривают появление хлопьев преципитата.

Учет результатов:

++++ жидкость прозрачная, четко выраженный хлопьевидный осадок

+++ жидкость слегка опалеецирует, четко выраженный хлопьевидный осадок

++ жидкость опалеецирует, видимый хлопьевидный осадок

- при отрицательном результате жидкость в пробирке остается прозрачной или слегка опалесцирует.

Результат: ________________________________________________________________ .
Вывод: При постановке осадочной реакции с антигеном___________________________

реакция_____________________________________________________________________,

что свидетельствует о_________________________________________________________.

Вопросы для самоконтроля

Механизм реакций преципитации.
Виды реакций преципитации
Использование реакций преципитации

Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Реакции лизиса и фагоцитоза.

Цель: Разобрать механизм реакций лизиса и фагоцитоза и освоить методику постановки реакции связывания комплемента.

Мотивация: Знание механизмов и методик постановки реакций лизиса и фагоцитоза необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций.

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы:

лизис; комплемент; фагоцитоз;

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

Реакции лизиса. Виды. Механизм.
Характеристика комплемента. Значение реакции лизиса в иммунитете и патологии.
Реакция связывания комплемента. Механизм. Практическое использование.
Фагоцитоз. Виды (завершенный, незавершенный, внешний). Практическое значение.

Реакция связывания комплемента (РСК)

Принцип метода:

Специфический комплекс АГ + АТ всегда адсорбирует на себе комплемент.

Инградиенты:

В РСК участвуют две системы:

1. Основная. Состоит из АГ и AT (один компонент известен, другой - нет). Если АГ соответствует AT, то образуется комплекс, который свяжет комплемент. Этот комплекс не виден. Об образовании его узнают при помощи 2^й системы.

2. Индикаторная (гемолитическая) система. Состоит из эритроцитов барана (АГ) и соответствующей им гемолитической сыворотки (AT), т.е. это готовый иммунный комплекс

"+" феномен РСК - отсутствие гемолиза (содержимое лунки

мутное или на ее дне осадок эритроцитов

"—" феномен РСК - гемолиз ("лаковая кровь", жидкость прозрачна)

Определение фагоцитарного показателя

Для постановки опыта к 0,2 мл цитратной крови добавляют 0,1мл 2 млрд. взвеси бактерий. После инкубации в термостате при 37°С в течение 30 минут взвесь встряхивают, готовят мазки крови и окрашивают по методу Романовского - Гимзе или метиленовой синью.

При микроскопии материала в разных полях зрения подсчитывают не менее 50 лейкоцитов и общее количество микробов в них. Фагоцитарный показатель получается при делении общего количества микробов, поглощенных фагоцитами, на количество фагоцитирующих клеток.

ПРИМЕР: в 50 лейкоцитах содержатся 184 бактерии

фагоцитарный показатель = 184 /50 = 3,68
Методика постановки опсоно-фагоцитщой реакции. Определение опсонического индекса.

Для определения опсонического индекса необходимо:

1- лейкоциты здорового человека или экспериментального животного

2 - взвесь бактерий, концентрацией 7-8 млрд. в I мл.

3 - исследуемая сыворотка, содержащая антитела к данному микробу.

4 - сыворотка здорового человека.

Готовят две взвеси:

I. 0,1 мл взвеси лейкоцитов + 0,1 мл взвеси бактерий + 0,2 мл иммунной сыворотки.

2. 0,1 мл взвеси лейкоцитов + 0,1 мл взвеси бактерий + 0,2 мл сыворотки здорового человека (контроль).

Смеси инкубируют в течение 10 минут при 3'7°С, после чего готовят мазки, окрашивают по Романовского-Гимза или метиленовой синью. Подсчитывают фагоцитарный показатель в отношении опыта и контроля. Отношение фагоцитарного показателя в присутствии иммунной сыворотки к фагоцитарному показателю в присутствии нормальной сыворотки составляет опсонический индекс.

ПРИМЕР: Фагоцитарный показатель иммунной сыворотки равен 40,

нормальный - 10, опсонический индекс равен 40/10 = 4.

ПРОТОКОЛ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ
Реакция связывания комплимента

Оснащение:

Пробирки, пипетки, физраствор, исследуемая сыворотка, антиген, гемолитическая сыворотка, комплимент, эритроциты барана.
Схема постановки РСК с одним антигеном

№ пробирки	1	2 (КАТ)	3(КАГ)	4
Физ.р-р	-	0,5	0,5	-
Сыворотка больного (антитела)	0,5	0,5	-	-
Антиген	0,5	-	0,5	-
Комплимент	0,5	0,5	0,5	-
Гемолитическая сыворотка	-	-	-	1,5
Эритроциты барана	-	-	-	1,5

Инкубация в термостате в течение 1 часа.

Гемолитическая система

1,0

Учет результата:
++++ полная задержка гемолиза (жидкость бесцветная, значительный осадок склеившихся эритроцитов).

+++ ясная задержка гемолиза (жидкость слабо розового цвета, значительный осадок эритроцитов).

++ частичная задержка гемолиза (жидкость интенсивно окрашена, компактный осадок эритроцитов).

+ слабая задержка гемолиза (жидкость интенсивно окрашена, незначительный осадок). - полный гемолиз (" лаковая кровь", отсутствие осадка).
Результат: 2 пробирка контроль антитела – _______________________________________

3 пробирка контроль антигена - _________________________________________________

1пробирка опытная - ___________________________________________________________

Вывод: При постановке реакции связывания комплемента с__________________________

антигеном ___________________________________________________________________.

Вопросы для самоконтроля

Механизм реакций лизиса
Виды реакций лизиса
Использование реакции связывания комплемента

Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Современные методы иммунодиагностики.

Цель: Ознакомиться с современными методами иммунодиагностики и освоить технику постановки иммуноферментного анализа. Закрепить знания по теме «Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций».

Мотивация: Знание механизма и методики постановки реакции иммуноферментного анализа необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций.

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы:

радиоиммунный анализ; иммуноферментный анализ

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

Радиоиммунный метод. Техника постановки. Практическое использование.
Иммуноферментный анализ. Техника постановки. Практическое использование.

Иммуно-ферментный анализ (ИФА)
Принцип метода:

Антитела к искомому антигену фиксируют на носителе (в лунках полистироловой панели). Вносят исследуемый материал, добавляют антитела, меченые ферментом и хромогенный субстрат. Все этапы разделяются интенсивной промывкой лунок.

При соответствии АГ и AT жидкость в лунке по завершении реакции меняет цвет, причем интенсивность окрашивания пропорциональна количеству искомого компонента.

"+" феномен ИФА - появление окрашивания

"—" феномен ИФА - отсутствие окрашивания

ПРОТОКОЛ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ

Оснащение:

набор для постановки ИФА, исследуемая сыворотка.

Схема постановки реакции

1 фаза постановки ИФА.

Промывка пластины с антигеном фосфатно-солевым буфером по 0,2 мл (4 капли) в каждую лунку (0,1 – 2 капли).

	1	2	3	4	5	6
Исследуемая сыворотка 1/100	-	0,1	0,1	0,1	-	-
Контрольная сыворотка №1	-	-	-	-	0,1	-
Контрольная сыворотка №2	-	-	-	-	-	0,1
Контроль конъюгата	0,1	-	-	-	-	-

Инкубация пластины в термостате при 37⁰С в течение 30 минут.
2 фаза постановки ИФA.

Промывка пластин троекратно фосфатно-солевым буфером по 0,2 мл в каждую лунку.

	1	2	3	4	5	6
Перексидазный конъюгат	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1

Инкубация пластин в термостате при 37°С в течение 30 минут.
3 фаза постановки ИФА.

Промывка пластин троекратно фосфатно-солевым буфером по 0,2мл в каждую лунку.

	1	2	3	4	5	6
Хромоген	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1

Инкубация пластин в термостате при 37⁰С в течение 10 минут.Во все лунки добавить по I капле серной кислоты (Н₂ SO₄).

Учет результатов:

Результат ИФА регистрируют с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность при длине волны 492нм.

ИФА положителен, если показатель оптического поглощения исследуемой сыворотки превышает оптическую плотность критического.

Оптическая плотность критического = 0,1 + оптическая плотность контрольного конъюгата.

При визуальной регистрации реакции считают положительными, если имеются отчетливые различия в интенсивности окраски при реакции исследуемой сыворотки по сравнению с отрицательной контрольной сывороткой (появление интенсивно желтого окрашивания).

Результат: 5-я лунка (контроль сыворотки отрицательный) - .

6-я лунка (контроль сыворотки положительный) - .

1-я лунка (контроль коньюгата) - .

2,3,4 лунки (опытные) - .

Вывод: При постановке реакции ИФА с антигеном _________________________________

реакция_________________________,что свидетельствует о __________________________

Вопросы для самоконтроля

Механизм радиоиммунного анализа
Механизм иммуно-ферментного анализа
Использование реакций

Основная литература

1.Воробьев А.А. Медицинская и санитарная микробиологиялогия: учеб. пособиен для студентов мед вузов/. А.А.Воробьев и др. – 4-е изд., стер.- М.:Академия, 2010.-461 с: ил.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учеб. для мед. вузов / А.И.Коротяев и др.- 4-е изд., испр. И доп..- СПб.: СпецЛит, 2008. – 767 с.

3. Медицинская микробиология/ под ред. Поздеева O.K. - М.:ГЭОТАР Медиа, 2006. – 765 с.
Дополнительная литература

1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии : учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.С.Быкова, А.А. Воробьева, В.В.Зверева - 2-е изд.- М. : «Миа», 2008. - 272 с.

2. Воробьев А.А., Кривошеин Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская и санитарная микробиология: учебное пособие для студентов высших медицинских учебных заведении / А.А. Воробьев, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков – 2-е изд., М.: Академия, 2006.

3. Емцев В.Т., Мишустин Е.Н. Микробиология: учебник для вузов -5-е изд., перераб. и доп. - М.: Дрофа, 2005.- 442с.

4.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Зверева В.В., Бойченко М.Н. Учебник в 2-х томах, М.: ГЭОТАР- Медиа, 2010.

5.«Определитель бактерий Берджи». Под ред. Хоулта Дж., Крича Н., Смита П. И др. В двух томах. М.: «Медицина», 1982.

6. «Внутрибольничные инфекции». Под редакцией Венцела Р.П. М.: «Медицина»,1990.

7. Кузнецов Е.А. с соавт. Микробная флора полости рта и ее роль в

развитии патологических процессов. – М: «Медицина» -1996 г.

8. Боровский Е.В., Леонтьев В.К. Биология полости рта. – М: «Медицина». - 1991 г.

Перечень вопросов и заданий для самостоятельной работы

1. По теме «Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций заполнить в рабочей тетради разделы для самостоятельной работы: основные свойства антигенов; антигенная структура бактериальной клетки; антигенная структура вирусов; строение иммуноглобулинов; применение антигенов и антител (биопрепараты); реакция агглютинации; реакция пассивной гемагглютинации; реакция связывания комплемента; иммуно-ферментный анализ

1 ... 5 6 7 8 9 10 11 12 ... 31

	Методические указания к проведению практических занятий по дисциплине... М 545 Методические указания к проведению практических занятий по дисциплине «Микробиология, вирусология» для студентов педиатрического...		Отчет о самообследовании программы высшего образования по направлению... «микробиология», специализация «микробиология» и «молекулярная биология», реализуемого в федеральном государственном образовательном...
	Отчет о самообследовании программы высшего образования по направлению... «микробиология», специализация «микробиология» и «молекулярная биология», реализуемого в федеральном государственном образовательном...		Учебно-методическое пособие Дисциплина- «Микробиология» Учебно-методическое пособие предназначено для самостоятельной подготовки и выполнения лабораторных работ по курсу «Микробиология»...
	Хирургическая подготовка полости рта к протезированию У 80 больных, пользующихся зубными протезами, нет хорошей опоры для их фиксации в полости рта		Примерная программа дисциплины стоматология модуль «хирургия полости рта» Цель подготовка врача стоматолога, способного оказать амбулаторную стоматологическую хирургическую помощь пациентам с воспалительными...
	Рабочая программа специальной дисциплины 03. 02. 03.«Микробиология»		Введение в дисциплину. Основные задачи санитарии и гигиены ...
	Методические указания составлены в соответствии с учебным планом... Методические указания предназначены для студентов, обучающихся по направлению «Биология», магистерская программа «Микробиология и...		Рекомендации по работе Указания и советы Препарат FotoSan (Фотосан) используется для терапии инфекций в полости рта в следующих случаях
	"Гигиенические требования к производству, качеству и безопасности средств гигиены полости рта" Федерации всеми государственными органами и общественными объединениями, предприятиями		Рабочая программа по дисциплине (модулю) Биологическая химия биохимия полости рта «московский государственный медико-стоматологический университет имени а. И. Евдокимова»
	Методические указания составлены в соответствии с учебным планом... Методические указания предназначены для студентов, обучающихся по направлению «Биология», магистерская программа «Микробиология и...		Учебно-методический комплекс дисциплины «Микробиология» Учебно-методический комплекс составлен в соответствии с требованиями государственного образовательного стандарта высшего профессионального...
	Учебно-методический комплекс дисциплины «Морская микробиология» Учебно-методический комплекс составлен в соответствии с требованиями государственного образовательного стандарта высшего профессионального...		Учебно-методический комплекс дисциплины «Промышленная микробиология» Учебно-методический комплекс составлен в соответствии с требованиями государственного образовательного стандарта высшего профессионального...

Микробиология, вирусология микробиология полости рта

Вопросы для самоконтроля

Свойства антигенов.

Вопросы для самоконтроля

Разведение

Вопросы для самоконтроля

Вопросы для самоконтроля

Вопросы для самоконтроля

Похожие: