   На правах рукописи
Баженова Екатерина Анатольевна
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ, ДИАГНОСТИКА,
ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА ПСЕВДОМОНОЗА
И ЭНТЕРОКОККОЗА НУТРИЙ
06.02.02. – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,
микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Краснодар – 2013
Работа выполнена на кафедрах микробиологии, эпизоотологии и вирусологии; паразитологии, ветсанэкспертизы и зоогигиены ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор
кафедры паразитологии, ветсанэкспертизы
и зоогигиены ФГБОУ ВПО «Кубанский
государственный аграрный университет»
Шевченко Людмила Васильевна
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, заведующая
лабораторией терапии ГНУ
«Краснодарский научно-исследовательский
ветеринарный институт РАСХН»
Басова Наталья Юрьевна
кандидат ветеринарных наук, заведующая
отделом ветеринарно-санитарной
экспертизы ФГБУ «Краснодарская
межобластная ветеринарная лаборатория»
Марченко Татьяна Витальевна
Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Донской государственный аграрный
университет»
Защита диссертации состоится «29» августа 2013 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13).
Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» – http://www.kubsau.ru «26» июля 2013 г. и официальном сайте ВАК РФ – http://www.vak.ed.gov.ru.
Автореферат разослан «___»__________2013 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета И.А. Родин
Общая характеристика работы
Актуальность темы. Нутриеводство – перспективная отрасль пушного звероводства. От нутрий получают вкусное диетическое мясо, ценные шкурки различных расцветок. Мясо нутрий сочное, нежное и по вкусовым свойствам лучше мяса птицы и кроликов, а по количеству белка превосходит говядину, баранину и свинину, так как содержит относительно мало жира. В мясе мало холестерина. Поэтому его рекомендуют детям, беременным женщинам и кормящим матерям, а также людям с сердечно-сосудистыми заболеваниями (В.Ф. Кладовщиков, 2002; Н.А. Балакирев, 2012; М.В. Петров, 2013).
Разведением нутрий в России занимаются в различных климатических зонах государственные, фермерские хозяйства и нутриеводы-любители, но преимущественно в южных регионах (Г.А. Кузнецов, Е.Г. Сергеев, О.И. Федоров, 2003; И.А. Плотников, 2003). Стабильному развитию нутриеводства препятствуют бактериальные болезни: колибактериоз, псевдомоноз, энтерококкоз, стрептококкоз, сальмонеллез, пастереллез, стафилококкоз. Они регистрируются во многих развитых странах мира, в том числе и в России, наносят значительный экономический ущерб отрасли и протекают в последние годы преимущественно ассоциативно (Л.П. Миронова, 1999, 2000, 2001; В.Н. Александров, 2002; С.Н. Треглазов, Л.А. Малышева, 2003).
Надежной защитой нутрий от инфекционных болезней является специфическая профилактика. Применение ассоциированных вакцин в звероводстве, включающих несколько антигенов, позволяет снизить стрессовые ситуации у прививаемых животных, уменьшить трудозатраты и создать напряженный иммунитет в сжатые сроки (И.А. Плотников, О.Ю. Беспятых, 2003; В.А. Есепенок и соавт., 2005). По мнению многих ученых, инактивированные вакцины, изготовленные из штаммов возбудителей инфекционных болезней, выделенных в период эпизоотии, обладают более высокими антигенными и иммуногенными свойствами и способствуют созданию иммунитета достаточной напряженности (Р.Т. Маннапова, 1998; Н.Н. Шульга, 2006).
Учитывая сложную эпизоотическую обстановку, обусловленную совместным действием различных возбудителей, терапия заболеваний и разработка новых ассоциированных вакцин является одним из важнейших современных направлений в области инфекционной патологии животных.
Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучить особенности эпизоотического процесса, идентифицировать возбудители и разработать систему лечебных и профилактических мероприятий при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
изучить эпизоотическую ситуацию по инфекционным болезням нутрий и особенности эпизоотического процесса при псевдомонозе и энтерококкозе: этиология, возрастная динамика, клинические признаки, патоморфологические изменения;
провести индикацию и идентификацию культур Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) и Enterococcus faecalis (Е. faecalis), циркулирующих у нутрий;
разработать технологию изготовления и изучить иммунобиологические свойства новых моно- и ассоциированной гидроокисьалюминиевых формолвакцин (ГОА-формолвакцин) против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий;
изучить лечебное действие антибактериальных препаратов при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий;
разработать мероприятия по профилактике и ликвидации псевдомоноза и энтерококкоза нутрий.
Научная новизна. Впервые изучены особенности эпизоотического процесса при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий: этиология, возрастная динамика, клинические признаки, патоморфологические изменения.
Впервые проведена разработка технологии изготовления и изучены иммунобиологические свойства новых моно- и ассоциированной ГОА-формолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях.
Определена чувствительность выделенных культур к антимикробным препаратам, P. aeruginosa: цефотаксиму, амикацину, энрофлоксацину, стрептомицину, ампициллину, рифампицину, гентамицину, неомицину; E. fаecalis: цефотаксиму, цефалексину, энрофлоксацину, амоксициллину, рифампицину, левомицетину. Препараты цефосин и энроксил 5% впервые применены для терапии псевдомоноза и энтерококкоза нутрий.
Апробирована и внедрена в ветеринарную практику высокоэффективная комплексная система мероприятий по профилактике и терапии псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. Материалы диссертационной работы использованы при подготовке «Рекомендаций по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза нутрий в Краснодарском крае».
Научная новизна диссертационной работы подтверждена шестью патентами РФ на изобретение: № 2288002 «Способ изготовления вакцины против энтерококковой инфекции нутрий», № 2288003 «Вакцина против энтерококковой инфекции нутрий», № 2388487 «Способ изготовления вакцины против псевдомоноза нутрий», № 2388488 «Вакцина против псевдомоноза нутрий», № 2388489 «Способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий», № 2389505 «Вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий».
Теоретическая и практическая значимость диссертационной работы. Результаты проведенных исследований послужили теоретическим обоснованием для разработки и внедрения в производство новых моно- и ассоциированной ГОА-формолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий из эпизоотических штаммов P. aeruginosa и Е. faecalis. Для лечения псевдомоноза и энтерококкоза нутрий предложены эффективные антибактериальные препараты цефосин и энроксил 5 %. Разработана комплексная высокоэффективная система мероприятий по профилактике и терапии псевдомоноза и энтерококкоза нутрий.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
результаты изучения эпизоотической ситуации по инфекционным болезням нутрий и особенностей эпизоотического процесса при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий: этиология, возрастная динамика, клинические признаки, патоморфологические изменения;
результаты исследований по индикации и идентификации культур P. aeruginosa и Е. faecalis, циркулирующих у нутрий;
результаты разработки технологии изготовления и методов контроля новых моно- и ассоциированной ГОА-формолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий;
результаты изучения иммунобиологических свойств и эффективности новых инактивированных моно- и ассоциированной ГОА-формолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях;
результаты изучения эффективности антибактериальных препаратов при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий;
комплексная высокоэффективная система мероприятий по профилактике и терапии псевдомоноза и энтерококкоза нутрий.
Апробация работы. Основные положения и результаты исследований диссертационной работы были доложены и одобрены на 3-ей Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (г. Краснодар, 2009 г.); на заседаниях ученого совета Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2009 – 2013 гг.); на научных конференциях сотрудников и аспирантов факультета ветеринарной медицины КубГАУ (г. Краснодар, 2010 – 2013 гг.); на 5-ой международной научно-практической конференции молодых ученых (г. Краснодар, 2011 г.); на 2-ой международной научно-практической конференции «Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения» (г.Краснодар, 2011г.).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе 5 в журналах, рецензируемых ВАК РФ, а также «Рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза нутрий в Краснодарском крае».
Структура и объём работы. Диссертация изложена на 161 странице текста компьютерного исполнения, включает разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, предложения производству, список использованной литературы, приложения. Текст диссертационной работы иллюстрирован 49 рисунками и 17 таблицами. Список литературы содержит 179 источников, из числа которых 35 иностранных.
Материалы и методы исследований
Работа выполнена в период с 2008 по 2012 гг. на базе кафедр микробиологии, эпизоотологии и вирусологии; паразитологии, ветсанэкспертизы и зоогигиены ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» в соответствии с темой, государственный регистрационный № 01.2.00606830, ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», в индивидуальных подсобных хозяйствах Краснодарского края.
При выполнении диссертационной работы было проведено: 1437 клинических исследований нутрий, из них больных 231; 87 патологоанатомических вскрытий, изготовлено 437 гистологических препаратов; 398 бактериологических и 398 биохимических исследований, выделено 315 культур P. aeruginosa и E. fаecalis; на чувствительность к антибактериальным препаратам исследовано 590 культур (165 культур P. aeruginosa; 424 культуры E. fаecalis).
Эпизоотические особенности псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в хозяйствах Краснодарского края изучали, анализируя статистические данные отчетности государственного управления ветеринарии Краснодарского края и ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», и результаты собственных исследований за последние 5 лет (2008-2012 гг).
Для определения патогенности возбудителей, испытаний вакцин на безвредность, реактогенность, иммуногенность, пассажей и титрования возбудителей использовали 697 белых беспородных мышей (Murius) массой 17-22 г, нутрий (Myocastor coypus) различного возраста и окраса – 1435 голов. Нутрии были клинически здоровы. Животные были подобраны по принципу параналогов (по породной принадлежности, возрасту, физиологическому состоянию, упитанности). Рационы животных соответствовали нормам, разработанным в НИИ пушного звероводства и кролиководства им. В. А. Афанасьева (1966).
В работе использовали чистые культуры возбудителей псевдомоноза (P. aeruginosa) и энтерококкоза (E. faecalis), выделенные от вынужденно убитых и павших нутрий в Краснодарском крае.
Бактериологические посевы проводили из легких, печени, брыжеечных лимфоузлов, почек, сердца, содержимого кишечника, крови, головного мозга от вынужденно убитых и павших нутрий.
Культуральные свойства бактериальных культур оценивали по характеру роста на мясо-пептонном агаре (МПА), мясо-пептонном бульоне (МПБ) с 1% глюкозы, ЭДДС (энтерококковая дифференциально-диагностическая среда), среде с теллуритом калия, ЦПХ-агаре, кровяном агаре (5 % эритроцитов барана).
Идентификацию выделенных бактериальных культур осуществляли по культуральным, морфологическим, тинкториальным свойствам в соответствии с нормативными документами: «Методические указания по лабораторным исследованиям на псевдомоноз животных и птиц», рекомендованные ГУВ МСХ СССР № 432 - 3 от 14. 11. 1988 г., «Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденные 25 сентября 1990 г., «Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных», рекомендованные отделением ветеринарной медицины РАСХН в 2003 г.
Биохимическую активность выделенных бактериальных культур оценивали на микробиологическом анализаторе Мультискан с программным обеспечением «Система микробиологического мониторинга «Микроб-Автомат», а также тест-систем «НЕФЕРМтест24» и «ЭН-коккус тест» фирмы PLIVA-Lachema Diagnostika, Чехия.
Патогенные свойства псевдомонад и энтерококков определяли внутрибрюшинным заражением беспородных белых мышей массой 17-22 г. Культуру считали патогенной, если в течение 5 дней из 3-х инфицированных мышей выживало не более одной.
Безвредность моно- и ассоциированной вакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий оценивали на белых беспородных мышах массой 17-22 г, нутриях в возрасте 40-60 дней путем соответственно подкожного и внутримышечного введения им вакцины в 3-5-кратной иммунизирующей дозе, выявляемой опытным путем на белых мышах, нутриях.
Иммуногенность вакцинных препаратов оценивали по проценту выживаемости (защиты) привитых нутрий (белых мышей) после заражения их вирулентными возбудителями псевдомоноза (P. aeruginosa) и энтерококкоза (E. faecalis) в летальных дозах, определяемых предварительным титрованием на нутриях и белых мышах.
Патоморфологические исследования проводили по общепринятым методикам (Г. А. Меркулов, 1969). Во время вскрытия трупов нутрий отбирали кусочки пораженных органов: печени, почек, селезенки, сердца, легких, кишечника, лимфоузлов, фиксировали в 10 % нормальном растворе формалина, изготавливали парафиновые срезы толщиной 6-8 μ, окрашивали гематоксилином и эозином и при помощи микроскопа МБИ-15 с цифровой камерой изучали и фотографировали их.
Определение чувствительности выделенных штаммов P. aeruginosa и E. faecalis к антибактериальным препаратам проводили методом диффузии в агар с применением дисков согласно методическим указаниям по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных (М.,1972), рекомендаций по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (А.В. Скориков, 2005).
Серологическую типизацию выделенных штаммов P. aeruginosa определяли в реакции агглютинации (РА) со специфическими сыворотками (Д.И. Скородумов, 2005).
Экономический ущерб и эффективность лечебно-профилактических мероприятий определяли по утвержденному Главветупром СССР документу: «Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (М., 1982 г.).
Для обработки цифровых данных применяли компьютер с использованием стандартных прикладных программ «Microsoft Word», «Microsoft Excel» и «Adbe PhotoShop».
|
