СОДЕРЖАНИЕ И МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ЗАНЯТИЙ
Темы лабораторных работ:
Модуль 1. Общие вопросы медицинской микробиологии
Работа 1. Методы оценки антимикробного действия химических и физических факторов (2 часа)
Работа 2. Методы оценки эффективности действия антимикробных препаратов (2 часа)
Работа 3. Микрофлора тела здорового человека (2 часа)
Модуль 2. Частные вопросы медицинской микробиологии
Работа 4. Возбудители гнойно-воспалительных заболеваний: стафилококки, стрептококки (2 часа)
Работа 5. Гнойно-воспалительные заболевания, вызванные грамотрицательными микроорганизмами: клебсиеллами, псевдомонадами (2 часа)
Работа 6. Возбудители анаэробной инфекции: клостридии газовой гангрены, столбняка, ботулизма (2 часа)
Работа 7. Вирусологическое исследование. Выявление (индикация) и идентификация вирусов (2 часа)
Работа 8. Микробиологическая диагностика микозов (2 часа)
Модуль 1. Общие вопросы медицинской микробиологии
Раздел 1.1 Значение медицинской микробиологии в создании нормативно-правовой основы системы биологической безопасности
Лабораторная работа 1. Методы оценки антимикробного действия химических и физических факторов
Дезинфекция – мероприятия направленные на уничтожение микроорганизмов на объектах внешней среды (в том числе изделиях медицинского назначения), способные вызывать инфекционные заболевания у человека. Дезинфекция как в профилактических целях, так и по эпидемическим показаниям, проводится с целью создания безопасных условий деятельности медицинского персонала и населения, снижения уровня инфекционной заболеваемости и предотвращения групповой и вспышечной заболеваемости среди различных категорий последнего во исполнение Федерального закона от 30.03.99 г. № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
Задачей дезинфекции является предупреждение или ликвидация процесса накопления, размножения и распространения возбудителей заболеваний путем их уничтожения или удаления с объектов и предметов, что обеспечивает прерывание путей передачи заразного начала от больного к здоровому.
В клинико-диагностических и микробиологических лабораториях, где медицинскому персоналу по роду своей деятельности приходится постоянно контактировать с инфицированным материалом, выделять чистые культуры возбудителей инфекционных заболеваний, определять их видовую принадлежность, дезинфекция приобретает особое значение. Она предупреждает заражение, возникновение внутрибольничных инфекций и вынос возбудителей инфекционных заболеваний за пределы лаборатории.
Дезинфекцию подразделяют на профилактическую и очаговую, а последнюю — на текущую и заключительную. Профилактическая дезинфекция проводится с целью профилактики возникновения инфекционных заболеваний, а очаговая — в очагах инфекционных заболеваний.
Профилактическая дезинфекция осуществляется многократно независимо от наличия инфекционных заболеваний (при отсутствии выявленного источника инфекции) и имеет целью предупредить их возникновение и распространение, накопление возбудителей этих заболеваний или, их переносчиков на объектах окружающей среды, т. е. защитить человека от возможного заражения; Профилактическая дезинфекция проводится там, где источник инфекции не выявлен, но есть условия для распространения инфекции:
Текущая дезинфекция проводится непосредственно в окружении больного или бацилловыделителя в течение всего периода выделения заразного начала с целью Предупреждения распространения возбудителей инфекционных заболеваний в окружающей среде, могущего повлечь, за собой заболевания других лиц. Этот вид дезинфекции проводит медперсонал учреждения или члены семьи до момента госпитализации больного.
Заключительная дезинфекция направлена на уничтожение возбудителя инфекционного начала в очаге после госпитализации, выздоровления, смерти больного или в других случаях его убытия. Проводится, как правило; однократно и должна начинаться немедленно после эвакуации инфекционного больного.
При организации дезинфекционных мероприятий в лабораториях необходимо учитывать специфику и виды деятельности, знать объекты, наиболее часто и массивно обсеменяемые патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, их устойчивость и длительность выживания во внешней среде, механизм передачи, устойчивость к лечебным и дезинфицирующим средствам.
Ответственность за организацию и проведение дезинфекционных мероприятий в лабораториях несет руководитель учреждения (организаций), который должен ориентироваться на действующие нормативные, распорядительные и методические документы.
Стерилизация – это уничтожение на объектах внешней среды всех форм микроорганизмов, включая споровые. Стерилизацию изделий медицинского назначения (ИМН) проводят с целью умерщвления на них всех патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизации подлежат все изделия, соприкасающиеся с раневой поверхностью, контактирующие с кровью, а также изделия которые в процессе эксплуатации контактируют со слизистой оболочкой и могут вызвать ее повреждение. ИМН многократного применения, подлежащие стерилизации, перед стерилизацией подвергают стерилизационной очистке.
Опрос по теме занятия.
Контрольные вопросы.
1. Перечислить методы дезинфекции. Дать краткую характеристику каждому методу.
2. Перечислить способы дезинфекции. Дать краткую характеристику каждому способу.
3. Перечислить группы дезинфицирующих средств, в зависимости от входящих в их состав активнодействующих веществ (ДВ). Дать краткую характеристику каждой группе.
4. Указать методы стерилизации и стерилизуемые ими агенты.
5. Перечислить режимы воздушной стерилизации и стерилизации паровым методом
Одной из задач медицинской микробиологии является обеспечение микробиологического контроля противоэпидемического режима как в лечебных организациях, так в микробиологических лабораториях. Такой контроль включает:
Исследование микробной обсеменённости поверхностей;
Контроль микробной обсемененности воздуха;
Эффективность обеззараживания и стерилизации;
Оценку эффективности ультрафиолетового облучения.
1. Исследование микробной обсеменённости поверхностей
Контроль качества дезинфекции рабочих поверхностей и оборудования проводят методом смывов. Контролю подлежат поверхности рабочих столов, внутренние поверхности термостатов, холодильников для хранения культур, емкости для дезинфицирующих растворов, лабораторная посуда. Смывы берутся после дезинфекции, по окончании экспозиции.
С поверхности рабочих столов, инвентаря, наружных деталей приборов, стен бокса, дверных ручек
|
БКГП
|
1 раз в месяц
|
Синегнойная палочка
|
S. aureus
|
Патогенные м/о
|
По эпид. показаниям
|
Яйца гельминтов
|
1 раз в месяц (для лабораторий, выполняющих исследования с материалом, подозрительным на зараженность гельминтами)
|
Нуклеиновые кислоты
|
1 раз в квартал (для лабораторий, выполняющих ПЦР исследования)
|
2. Контроль микробной обсемененности воздуха
Контроль проводят в посевных комнатах, боксах или в ламинарных укрытиях перед началом проведения работ. Посев проводят на плотную полноценную неселективную среду (питательный агар, ГРМ-агар и др.) седиментационным или аспирационным методом. При седиментационном методе в двух точках посевной комнаты, бокса и (или) ламинарного шкафа ставят открытые чашки Петри с питательным агаром на 15 мин. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±2) часов. Допускается пророст не более 3 колоний на чашке. При аспирационном методе отбор воздуха проводится пробоотборным прибором в количестве 100л согласно инструкции к пробоотборнику. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±2) часов. Допускается не выше 500 КОЕ/м3. Использование аспирационного метода не допускается для контроля воздуха укрытий с ламинарным потоком
3. Эффективность обеззараживания и стерилизации
Контролю подвергаются все виды лабораторной посуды, используемые для исследований: стеклянные, многоразового использования после стерилизации и пластиковые одноразового использования, поступающие стерильными от производителя. Целью проведения данного вида контроля является выборочный контроль качества подготовки посуды. В случае получения результата, свидетельствующего о нестерильности хотя бы одной емкости, все партии посуды, прошедшие обработку в данном стерилизаторе, бракуют. Забракованные партии посуды подлежат повторной стерилизации. Выясняют возможные причины нарушения стерильности. Проводят комплексную проверку стерилизатора с одновременным использованием химического, термического (в 5 точках) и биологического контроля.
Определение стерильности готовой питательной среды проводят визуально путем просмотра 3-5 % каждой партии после инкубации в термостате при температуре 37 °С в течение 2-14 суток в зависимости от типа среды. Обнаружение после инкубации помутнения жидкой (полужидкой) среды или появление на чашках (пробирках) колоний свидетельствует о нестерильности среды, и вся исследуемая среда подлежит повторному контролю на удвоенном количестве образцов. При повторном подтверждении результата среда подлежит уничтожению.
Контроль эффективности обеззараживания и стерилизации
Каждая единица стерилизационной техники
|
Химический контроль с использованием химических индикаторов
|
Постоянно при каждом цикле
|
Термический контроль с использованием термометров, термопар
|
2 раза в месяц
|
Биологический контроль с использованием биотестов, имеющих дозированное количество спор тест-культуры.
|
2 раза в год
|
Биологический контроль автоклавов для стерилизации питательных сред
|
1 раз в квартал
|
Итак, контроль эффективности работы стерилизационного оборудования осуществляется физическими, химическими и биологическим (бактериологическим) методами. Надежность этих методов неодинакова. Физические и химические методы предназначены для оперативного контроля и позволяют контролировать соблюдение параметров режимов паровой, газовой, воздушной стерилизации, температуру, давление, экспозицию. Недостаток этих методов заключается в том, что они не могут служить доказательством эффективной стерилизации. Достоверным для определения эффективности является только бактериологический метод. Для проведения бактериологического контроля используются биотесты, имеющие дозированное количество спор тест-культуры.
В настоящее время Европейским Союзом принят стандарт по биологическим индикаторам EN ISO 11138 (у нас в стране аналог – ГОСТ Р ИСО 11138-2000 «Стерилизация медицинской продукции. Биологические индикаторы»), где под биологическим индикатором понимается «тестовая система, содержащая жизнеспособные микроорганизмы, которые обеспечивают определенную устойчивость к заданному процессу стерилизации».
4. Оценка эффективности ультрафиолетового облучения
Ультрафиолетовое излучение с длинной волны 260-300 мкм обладает достаточно выраженным микробицидным действием, однако некоторые виды микробов и споры резистентны к УФ. Обработку УФ обычно используют для дезинфекции крупных объектов и воздуха помещений. Бактерицидная эффективность ультрафиолетового облучения определяется подсчетом числа микроорганизмов, содержащихся в воздухе до и после облучения, и затем оценивается в процентах по формуле:
БЭ = (Nо - Nв/Nо) х100%,
где БЭ – бактерицидная эффективность облучения;
Nо – число микроорганизмов до облучения;
Nв – число микроорганизмов после облучения.
Эффективное бактерицидное излучение – БЭ не менее 99%.
Задания
1. Провести контроль эффективности мероприятий по обеззараживанию объектов внешней среды микробиологических лабораторий: воздуха помещений, поверхностей лабораторного оборудования.
2. Указать режимы и аппаратуру, используемую для стерилизации растворов питательных сред.
3. Провести контроль эффективности стерилизации.
|
