ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке и плазме крови человека кинетическим методом
«ЩФ–UTS»
Набор «ЩФ –UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05466
Информация для заказа набора «ЩФ–UTS»
Кат. №
|
Комплектация
|
Количество определений
|
ЩФ-09-002-120
|
Р1 96 мл + Р2 24 мл
|
120/v*
|
ЩФ-09-002-240
|
Р1 192 мл + Р2 48 мл
|
240/v
|
ЩФ-09-002-480
|
Р1 384 мл + Р2 96 мл
|
480/v
|
* v – объем фотометрической ячейки анализатора.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ЩФ-UTS» предназначен для определения активности щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке или плазме крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. ЩФ относится к классу гидролаз, катализирующих гидролиз фосфомоноэфиров до соответствующих спиртов и фосфата, и имеющая оптимум активности в щелочной среде. Наиболее богаты ЩФ костная ткань, слизистая оболочка кишечника, клетки печени, плацента и почки. ЩФ попадает в кровь вследствие цитолиза клеток, содержащих этот фермент [1,2,3]. На этом основано клиническое значение анализа.
1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003.
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Набор «ЩФ-UTS» разработан согласно рекомендациям Немецкого Общества Клинической химии (DGKC). ЩФ катализирует гидролиз п-нитрофенилфосфата при pH 10,4, с образованием эквимолярного количества п-нитрофенола и фосфата, согласно следующей реакции:
п-нитрофенилфосфат + H2O  п-нитрофенол + фосфат
Cкорость образования п-нитрофенола измеряется фотометрически при длине волны 405 нм и прямо пропорциональна каталитической активности щелочной фосфатазы [1,2,].
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 405 нм молекулами п-нитрофенола. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально скорости накопления п-нитрофенола и, следовательно, прямо пропорционально активности ЩФ в анализируемом образце.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Поскольку рабочий реагент, содержащий все компоненты для обеспечения химического анализа, нестабилен, набор реагентов «ЩФ-UTS» поставляется в виде двух реагентов - Р1 и Р2.
Компоненты и их состав:
Наименование
|
Состав
|
Концентрация
|
Реагент 1 (Р1)
Буферный раствор
|
диэтаноламин (ДЭА), pH 10,2,
магний хлористый
|
1,25 ммоль/л
0,6 ммоль/л
|
Реагент 2 (Р2)
Субстрат
|
п-нитрофенилфосфат
|
50 ммоль/л
|
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения активности ЩФ от 10,0 МЕ/л до 800 МЕ/л, отклонение от линейности во всем указанном диапазоне не превышает 5%.
4.2. Чувствительность – не более 10 МЕ/л.
4.3. Воспроизводимость - коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
4.4. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данным методом.
4.5. Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется использовать сывороточные калибраторы, аттестованные по значению активности ЩФ данным методом (DGKC). 4.6. Нормальные величины активности ЩФ в сыворотке или плазме взрослого человека при 37 оС
70-270 МЕ/л [4].
4.7. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение активности ЩФ, приведены в обзоре [5].
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент Р1 содержит диэтаноламин, реагент 2 п-нитрофенилфосфат. Следует избегать попадания этих реагентов на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
Для выполнения анализа активности ЩФ с применением набора реагентов «ЩФ-UTS» рекомендуется использовать полуавтоматический или автоматический биохимический анализатор, позволяющий выполнять измерение скорости изменения оптической плотности при длине волны 405 нм (кинетический режим) и обеспечивающий термостатирование фотометрической ячейки при температуре +(37±0,5) ОС.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Сыворотка крови или (гепаринизированная) без следов гемолиза.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови немедленно после взятия крови.
7.3. Образцы сыворотки и плазмы крови стабильны 2-3 суток при +(2-8) ОС, 1 месяц при -20 ОС [4].
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Приготовление рабочего реагента. Смешать Реагент 1 и Реагент 2 в соотношении 4:1. Полученный раствор рабочего реагента стабилен 30 дней при температуре 2-8 ОС или 5 суток при
18-25 ОС.
8.2. Раствор рабочего реагента прогреть до +(37±0,5) ОС.
8.3. Оптическая плотность реагента при 405 нм должна составлять не более 0,75 ед. опт. плотн. (Б), (при использовании кювет с длиной оптического пути 10 мм).
8.4. Для проведения анализа на полуавтоматическом анализаторе должен быть выбран кинетический режим измерений с калибровкой по фактору и установлены следующие значения параметров методики:
Параметр
|
Значение
|
Имя теста
|
ЩФ
|
Основной светофильтр
|
405
|
Дополнительный светофильтр
|
600
|
Фактор, F0
|
3300*
|
Время лаг-фазы
|
1 мин.
|
Время измерения
|
3 мин. (3 измерения с интервалом 1 мин)
|
Единицы измерения
|
Е/л (МЕ/л)
|
Линейность, МЕ/л
|
10,0 - 800
|
* Фактор F0 указан для случая использования кювет с длиной оптического пути (L0) 1 см. При использовании кювет или пробирок с иным оптическим путем (L1) следует рассчитать значение фактора (F1) по формуле: F1=F0·L0/L1.
8.5. Проведение реакции.
Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
Наименование
|
Фотометрический объем 1 мл
|
Фотометрический объем 0,5 мл
|
Рабочий реагент
|
1000 мкл
|
500 мкл
|
Сыворотка или плазма крови
|
20 мкл
|
10 мкл
|
8.5.1. При использовании биохимических анализаторов с другим фотометрическим объемом количество рабочего реагента и анализируемых образцов в зависимости от объема используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотношение сыворотки или плазмы крови к рабочему реагенту составляет 1:50).
8.5.2. Пробы перемешать, поместить в фотометрическую ячейку анализатора. На стадии лаг-фазы в течение 1 минуты скорость изменения концентрации п-нитрофенола выходит на линейный режим. После стадии лаг-фазы начинаются кинетические измерения.
8.5.3. Результат анализа - активность ЩФ рассчитывается автоматически при введении в память полуавтоматического биохимического анализатора фактора, указанного в таблице.
8.5.4. Если результат определения активности ЩФ превышает 800 МЕ/л, то следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 10 раз и повторно провести измерение, а полученный результат умножить на 10.
8.6. Для проведения анализа на автоматическом биохимическом анализаторе следует:
8.6.1. Установить программу определения активности ЩФ согласно таблице:
-
Наименование параметра
|
Значение
|
Метод измерения
|
кинетический
|
Длина волны, нм
|
основная 405, дифференциальная 600
|
Измерение против
|
Воздух или дист. вода
|
Температура реакции
|
37 ОС
|
Единица измерения
|
Е/l, (МЕ/л)
|
Число знаков после запятой
|
0
|
Изменение оптической плотности
|
Увеличивается
|
Фактор*
|
Зависит от длины оптического пути
|
Соотношение рабочего реагента/проба
|
50:1
|
Количество измерений, не менее
|
3
|
Время лаг-фазы, мин
|
1
|
Время реакции, мин
|
1
|
Верхний предел абсорбции реагента против воды, Б
|
2,2
|
Нижний предел абсорбции реагента против воды, Б
|
0
|
Максимальная скорость изменения абсорбции, Б/мин
|
0,15
|
Границы линейности, МЕ/л
|
10-800
|
Максимум нормы, МЕ/л
|
270**
|
Минимум нормы, МЕ/л
|
70**
|
* - Перед первым использованием набора необходимо определить значение фактора по мультикалибратору, аттестованному по активности ЩФ методом DGKC. Полученное значение ввести в память анализатора.
** - Нормальные величины активности ЩФ у взрослого человека после 31 года.
8.6.2. Приготовление рабочего реагента см. пункт 8.1.
8.6.3. Если результат измерения активности ЩФ выше 800 МЕ/л, следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 10 раз, повторно провести измерение, полученный результат умножить на 10.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «ЩФ -UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2-8 ОС в течение всего срока годности. Допускается хранение набора до 25 ОС не более 10 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.
9.2. Срок годности набора 18 месяцев с даты его изготовления.
9.3. Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре 2–8 ОС в плотно закрытых флаконах в темном месте в течение всего срока годности набора.
9.4. Рабочий реагент можно хранить в плотно закрытом флаконе при температуре 2–8 ОС не более 30 суток или при комнатной температуре (18–25 ОС) не более 5 суток.
9.5. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы
1. Wenger C. Alkaline phosphatase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1094-1098.
2. Rosalki S et al. Clin Chem 1993; 39/4: 648-652.
3. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
4. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «ЩФ –UTS» следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31,
Факс: (495) 564-86-41;
E-mail: office@unimedao.ru; http://www.unimedao.ru
|
