ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для количественного определения содержания глюкозы
в сыворотке и плазме крови человека глюкозооксидазным методом
«ГЛЮКОЗА - UTS»
Набор «ГЛЮКОЗА - UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05457
Информация для заказа набора «ГЛЮКОЗА - UTS»
Кат. №
|
Комплектация
|
Количество определений
|
ГЛ-09-004-100
|
реагент 100 мл + калибратор 1 мл
|
100/v
|
ГЛ-09-004-400
|
реагент 400 мл + калибратор 4 мл
|
400/v
|
где v – объем фотометрической ячейки анализатора.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ГЛЮКОЗА - UTS» предназначен для определения концентрации глюкозы в сыворотке и плазме крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Глюкоза является одним из важнейших компонентов крови, ее количество отражает состояние углеводного обмена. Содержание глюкозы в крови повышается при сахарном диабете, эпидемическом энцефалите, повышении гормональной активности щитовидной железы и т.д. На этом основано клиническое значение анализа.
1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003.
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Глюкозооксидаза катализирует окисление β-D-глюкозы с образованием эквимолярных количеств глюконовой кислоты и перекиси водорода (1). Перекись водорода под действием пероксидазы в реакции с 4-аминоантипирин и фенолом образует окрашенный продукт – хинонимин (2), интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации глюкозы в анализируемом образце и измеряется фотометрически при длине волны 505 (490-550) нм [1,2].
β-D-Глюкоза + H2O + O2 Глюкозооксидаза Глюконовая кислота + Н2О2 (1)
2Н2О2 + 4-аминоантипирин + Фенол Пероксидаза Хинонимин + 4Н2О (2)
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 505 нм молекулами хинонимина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски хинонимина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации глюкозы в пробе.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Набор реагентов «ГЛЮКОЗА - UTS» поставляется в виде двух растворов: Реагента и калибратора.
Компоненты и их состав:
Наименование
|
Состав
|
Концентрация
|
Реагент
|
Фосфатный буфер, pH 7,5
Фенол
Глюкозооксидаза
Пероксидаза
4-аминоантипирин
|
100 ммоль/л
5 ммоль/л
>10 000 MЕ/л
>2 000 MЕ/л
0,5 ммоль/л
|
Калибратор
|
Водный раствор глюкозы
|
5,55 ммоль/л
|
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения концентрации глюкозы в диапазоне от 0,5 до 25 ммоль/л, отклонение от линейности не превышает 2,5%.
4.2. Чувствительность – не более 0,5 ммоль/л
4.3. Воспроизводимость - коэффициент вариации результатов определений – не более 2,5%.
4.4. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным глюкозооксидазным методом.
4.5. Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется использовать сывороточные калибраторы, аттестованные по концентрации глюкозы глюкозооксидазным методом.
4.6. Нормальные величины концентрации глюкозы в сыворотке или плазме взрослого человека составляют 4,1-5,9 ммоль/л [3].
4.7. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение концентрации глюкозы, приведены в обзоре [4].
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент содержит фенол и 4-аминоантипирин. Следует избегать попадания этих реагентов на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению концентрации глюкозы с применением набора реагентов «ГЛЮКОЗА – UTS» рекомендуется использовать фотометр, фотоэлектроколориметр, полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы, позволяющие выполнять измерение поглощения оптической плотности при длине волны 505 (490-550) нм (режим по конечной точке), и обеспечивающие термостатирование фотометрической ячейки при температуре
+(37±0,5) ОС.
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Негемолизированная сыворотка или плазма крови.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови немедленно после взятия крови.
7.3. Для замедления гликолиза и предотвращения свертывания при заборе крови использовать пробирки, содержащие антикоагулянт фторид натрия.
7.4. Образцы сыворотки или плазмы для проведения анализа на содержание глюкозы стабильны не более 3-х суток при +(2-8) ОС [3].
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Реагент и калибратор готовы к использованию.
8.2. Проведение ручного анализа с использованием фотометра или фотоэлектроколориметра.
8.3. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
-
Внести в кювету
|
Анализируемая проба, мкл
|
Калибровочная проба, мкл
|
Холостая проба, мкл
|
Реагент
|
1000
|
1000
|
1000
|
Калибратор
|
–
|
10
|
–
|
H2O
|
|
|
10
|
Сыворотка или плазма крови
|
10
|
–
|
–
|
8.4. Пробы тщательно перемешать и инкубировать при температуре +(37±0,5) ОС в течение 5 минут или при комнатной температуре (+18…+25 ОС) в течение 10 минут.
8.5. Измерить оптическую плотность анализируемой пробы и калибровочной пробы против холостой пробы в оптической кювете при длине волны 505 (490-550) нм. Окраска раствора стабильна в течение 30 минут.
Концентрацию глюкозы в сыворотке крови или плазме (ммоль/л) определить по формуле:
где: С – концентрация глюкозы в анализируемом образце сыворотки или плазмы в моль/л;
Аобр – оптическая плотность анализируемой пробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;
Акал – оптическая плотность калибровочной пробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;
Cкал – концентрация глюкозы в калибраторе, равная 5,55 ммоль/л.
8.6. Если полученная концентрация глюкозы в образце выше 25 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
8.7. Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом биохимическом анализаторах следует:
8.7.1. Установить программу определения концентрации глюкозы согласно таблице:
-
Наименование параметра
|
Значение
|
Метод измерения
|
Конечная точка
|
Длина волны, нм
|
Основная 505 (490-550), дифференциальная 600
|
Измерение против
|
дист. вода
|
Температура реакции
|
37 ОС
|
Единица измерения
|
ммоль/л
|
Число знаков после запятой
|
2
|
Изменение оптической плотности
|
Увеличивается
|
Соотношение реагент/проба
|
100:1
|
Концентрация калибратора, ммоль/л
|
5,55
|
Время реакции, мин
|
5 (37 ОС)
|
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот.
|
0,3
|
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот.
|
0
|
Границы линейности, ммоль/л
|
0,5-25
|
Максимум нормы, ммоль/л
|
5,9
|
Минимум нормы, ммоль/л
|
4,1
|
8.7.2. При первом использовании набора, а также при получении новой серии набора
«ГЛЮКОЗА-UTS» необходимо провести калибровку с использованием входящего в состав набора калибратора глюкозы.
8.7.3. Концентрация глюкозы в образце рассчитывается в ммоль/л на основании калибровочной прямой, рассчитанной автоматически и сохраненной в памяти биохимического анализатора.
8.7.4. Если полученная концентрация глюкозы в образце выше 25 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «ГЛЮКОЗА–UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2..+8 °С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25 °С не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.
9.2. Срок годности набора 18 месяцев с даты изготовления.
9.3. Реагент после вскрытия флакона может храниться при температуре +2..+8 °С в защищенном от света месте в течение всего срока годности в плотно закрытом флаконе.
9.4. Калибратор после вскрытия флакона может храниться при температуре +2..+8 °С в защищенном от света месте в течение 1 месяца в плотно закрытом флаконе.
9.5. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы
Kaplan L.A. Glucose. Kaplan A. et al. Clin. Chem. The C.V. Mosby Co. St.Louis. Torоnto, Prinston 1954; 1032-1036.
Trinder P. Ann Clin Biochem, 1989; 624-633.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «ГЛЮКОЗА–UTS» следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31,
Факс: (495) 564-86-41;
E-mail: office@unimedao.ru; http://www.unimedao.ru
|
