Программа (мероприятие): Федеральная целевая программ «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России»
|
Скачать 396.52 Kb.
|
Методы.Изучение морфологических и культуральных свойств.Для культивирования лактобактерий использовали микроанаэростат и GasPak Anaerobic System («BD», США). Температурный режим поддерживали с помощью термостата (37С0). Морфологические свойства лактобактерий изучали путем микроскопического исследования мазков окрашенных по Граму [5]; культуральные свойства изучали по характеру роста на жидких и плотных питательных средах. Изучение биохимических свойств.Биохимическую активность лактобактерий исследовали с помощью коммерческих тест-систем API-50 CHL, предназначенных для определения биохимических признаков. Для выделения чистотой культуры, лактобактерии выращивали на плотной питательной среде МРС в течение 24-48 ч. при 370С в присутствии СО2 (5%). Единичную колонию переносили в жидкую питательную среду МРС и культивировали 24 часа, при 370С в присутствии СО2 (5%). С целью оптимизации оценки биохимических свойств лактобактерий, культуру трижды выращивали на жидкой питательной среде. Перед постановкой тестов бактерии дважды отмывали на центрифуге 10 мин. при 3000 об/мин стерильным ФР или дистиллированной водой. Концентрацию микробной взвеси стандартизовали на КФК-2МП при λ=550 нм до D=0,5-0,75. Микробную взвесь помещали в питательную среду МРС, содержащую индикатор - бромкрезол пурпурный и разносили по микропробиркам. Результаты регистрировали спустя 6, 24 и 48 часов. Реакция агглютинации (РА).Изучение агглютинационных свойств лактобацилл с конА проводили микрометодом. Реакцию ставили в микропланшетах для иммунологических реакций в объеме 50 мкл. В ячейках микропланшетов готовили серийные двукратные разведения диагностических реагентов по 25 мкл, в последнюю лунку вместо этих реагентов вносили ЗФР - «контроль». В каждую лунку добавляли по 25 мкл бактериальной взвеси с концентрацией 5 ед.. Учет результатов проводили через 24 часа. Интенсивность реакции оценивали по 4-х бальной системе: "-" - агглютинат отсутствует, микробные клетки оседают в виде «пуговки» в центре лунки; "1+" - узкий ободок агглютината вокруг неагглютинировавших клеток; "2+" - агглютинат в виде широкой зоны вокруг «пуговки» неагглютинировавших микробных клеток; "3+" - клетки почти все агглютинируются, по центру агглютината отмечается небольшое кольцо неагглютинировавших клеток («зонтик» несколько спавший); "4+" - все микробные клетки агглютинируются и равномерно выстилают дно лунки (форма «зонтика»). Титром считали последнее разведение иммунной сыворотки, вызывающее реакцию на "3+". В контроле культуры обязательным было полное отсутствие агглютинации "-". Отбор агглютинирующих и не агглютинирующих колоний в популяции L.fermentum 90-TS-4 (21) проводили в РА на стекле.На предметное стекло наносили по 0,25 мл ЗФР (контроль) и конА. Затем петлей в каждую каплю вносили небольшое количество бактериальной культуры и перемешивали круговыми движениями до получения равномерной взвеси. Результаты РА на стекле учитывали через 2-5 мин. Определение количества белка, выделенного из КЖ лактобактерий.Определение белка проводили по методу Лоури [11]. Калибровочную кривую строили по сывороточному альбумину быка. Выделение лектинсвязывающего компонента (ЛСК) из культуральной жидкости (КЖ) лактобактерий с помощью метода мембранной диафильтрации. Выделение ЛСК проводили на ячейках фирмы AMICON (США) с использованием мембран «Диафло» и мембран «Милипор»с диаметром пор 0,02 мкм. Для этого суточную КЖ центрифугировали 15 мин. при 3000 об./мин и пропускали через стерилизующую мембрану (0,02 мкм). Благодаря этому удавалось освободиться от микроорганизмов и мелких частиц, присутствующих в КЖ. Супернатант КЖ очищали от низкомолекулярных компонентов и концентрировали путем диафильтрации на ячейках фирмы «AMICON» с использованием мембран UM-20, ХМ-100 и ХМ-300. Полученный материал собирали и хранили при t= -200C. С помощью реакции кольцепреципитации контролировали наличие ЛСК в КЖ. Регистрировали результат следующим образом: время реакции - «+» - более 15 мин., «++» - от 5 до 15 мин., «+++» - 5-10 сек., «++++» - первые секунды. |
Похожие:
 |
Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет... |
|
Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет... |
|
Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и... Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Национальный исследовательский... |
 |
1. Банковский сектор2 Федеральная целевая программа «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» |
|
Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургский государственный... |
|
Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта №16. 740. 11.... Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013... |
|
Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы |
|
Рф федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы |
|
Xl научная и учебно-методическая конференция Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009–2013 годы», а также результатов,... |
|
Методические рекомендации по оформлению отчета о выполнении показателей... Фцп «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы |
|
Учебное пособие Петрозаводск «Карелия» 2002 Федеральная целевая программа «Культура России» Федеральная целевая программа «Культура России» (подпрограмма «Поддержка полиграфии и книгоиздания России») |
|
Инструкция по заполнению Анкеты к заявке Дату вскрытия конвертов; для конкурсов-грантов фцп «Научные и научно-педагогические кадры» указать срок подачи заявки, указанный... |
|
Программа (задача, мероприятие): Федеральная целевая программа развития... Мероприятие 5 «Распространение во всех субъектах Российской Федерации современных проектов энергосбережения в образовательных учреждениях».... |
|
Программа (задача, мероприятие): Федеральная целевая программа «Развитие... Материалы, разработанные в соответствии со II этапом Государственного контракта №05. P14. 12. 0005 от 13 ноября 2014 г |
|
Информационный бюллетень №43 (конкурсы, гранты, конференции) Апрель 2009 г Федеральная целевая программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса... |
|
Федеральная целевая программа «Развитие гражданской авиационной техники... «Техническое перевооружение и реконструкция научно-испытательной, опытной и производственной базы по аэродинамике и прочности, 1-й... |