К практикуму по биологической химии
|
Скачать 3.04 Mb.
|
Самостоятельная работа (60 минут)Инструкция к практическому занятию Работа 1. Количественное определение активности a-амилазы слюны Метод основан на определении наименьшего количества амилазы (при максимальном разведении слюны), полностью расщепляющего весь добавленный крахмал. Амилазная активность слюны выражается количеством 0,1 % раствора крахмала в миллилитрах, которое расщепляется 1 мл неразведенной слюны при 38С в течение 30 мин. В норме амилазная активность слюны равна 160–320. Амилазная активность обозначается «А 380/30/». Этот метод широко используется для определения амилазной активности крови и мочи. Порядок выполнения работы. В 10 пробирок наливают по 1 мл воды и в 1-ю из них добавляют 1 мл разведенной в 10 раз слюны. Содержимое этой пробирки перемешивают, несколько раз втягивая и выпуская жидкость из пипетки. Набирают в пипетку 1 мл смеси и переносят ее во 2-ю пробирку. Содержимое этой пробирки перемешивают и 1 мл смеси переносят в 3-ю пробирку и т. д. до 10-й пробирки. Из 10-й пробирки отбирают 1 мл смеси и выливают. Во все пробирки добавляют по 1 мл воды и по 2 мл 0,1 % раствора крахмала, перемешивают, встряхивают пробирки и помещают в термостат при 38С на 30 мин. После инкубации пробирки охлаждают водопроводной водой, добавляют по 1 капле 0,1% раствора йода и перемешивают. При реакции с йодом жидкость в пробирках окрашивается в желтоватый, розовый и фиолетовый цвет. Отмечают последнюю пробирку с желтоватой окраской, где гидролиз крахмала прошел полностью, и делают расчет. Полученные данные заносят в таблицу: Гидролиз крахмала в присутствии ферментов слюны при различном ее разведении
Расчет. Отметив пробирку, где гидролиз крахмала прошел полностью при наименьшем количестве фермента, по количеству неразведенной слюны, в данной пробирке рассчитывают амилазную активность слюны по следующей пропорции: А мл слюны расщепили 2 мл 0,1 % раствора крахмала; 1 мл слюны расщепил x мл 0,1 % раствора крахмала, где А — количество неразведенной слюны. Например, желтоватая окраска появилась в 4-й пробирке, где слюна была разведена в 160 раз; 1/160 мл слюны расщепила 2 мл 0,1 % раствора крахмала; 1 мл неразведенной слюны расщепил x мл 0,1 % раствора крахмала: x = 2 . 1 . 160 / 1 = 320 мл 0,1% раствора крахмала. Следовательно, амилазная активность А 380/30/ равна 320. Ответ: Работа 2. Количественное определение активности амилазы (диастазы) мочи Метод основан на определении времени, необходимого для полного расщепления крахмала в присутствии 1 мл мочи. Условно за единицу активности амилазы мочи принимают количество фермента, расщепляющее 2 мг крахмала за 15 мин. Активность амилазы выражают количеством единиц в 1 мл мочи. В норме она составляет 1–2 ЕД, а по методу Вольгемута колеблется от 16 до 64 ЕД. Моча здоровых людей обладает низкой амилазной активностью по сравнению с амилазой слюны. Определение активности a-амилазы в моче и сыворотке крови широко используется в клинике при диагностике заболеваний поджелудочной железы. В 1-е сутки заболевания амилазная активность увеличивается в моче и сыворотке крови в десятки раз, а затем постепенно возвращается к норме. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует. В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эпидемическом паротите, что указывает на одновременное поражение поджелудочной железы вирусом паротита. Вирус гриппа также поражает поджелудочную железу, но реже. Порядок выполнения работы. На сухую чашку Петри (предметное стекло) заранее капают в разных местах по 1-й капле 0,1 % раствора йода в йодиде калия (всего 8–10 капель). В пробирку вносят 2 мл 0,1 % раствора крахмала, содержащего 2 мг крахмала, 1 мл 0,85 % раствора хлорида натрия и помещают пробирку в водяную баню при температуре 37С на 2 мин. Через 2 мин, не вынимая пробирку из бани, добавляют в нее 0,5 мл мочи, перемешивают и отмечают время начала реакции. Затем каждые 2–3 мин пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой переносят каплю смеси из пробирки на чашку Петри (предметное стекло) в каплю раствора йода и так продолжают до тех пор, пока окраска капли йода не перестанет изменяться, т. е. до появления желтого цвета, и отмечают время реакции в мин. Активность амилазы мочи рассчитывают по формуле: Xед = 15 / (Т . 0,5), где Xед — активность амилазы в 1 мл мочи; 15 — время, необходимое для полного расщепления 2 мг крахмала, мин; 0,5 — количество мочи, взятое в реакционную смесь, мл; Т — время реакции, мин. |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 |
3 альтернативные вопросы для текущего контроля, проводимого на каждом... Перед вами учебное пособие, составленное на основе многолетнего опыта работы преподавателей кафедры биологической химии медицинского... |
 |
Инструкция по эксплуатации общие сведения Биотуалет «Компакт Люкс Турбо», предназначен для эффективной механической и биологической переработки уборных отходов жизнедеятельности... |
|
Рабочая программа по химии (7 класс, 1 час в неделю) ... |
|
Тематическое планирование курса «Химия в литературе, литература в химии» Основные нормативные свойства химического языкаСтановление и развитие языка химии, основные этапы развития химии |
|
Биологической очистки бытовых сточных вод Установки и станции биологической очистки бытовых сточных вод технологической серии «9» соответствуют общим техническим требованиям... |
|
27 мая 2011 года Президент Республики Татарстан Р. Н. Минниханов... Международному Году химии. На «День химии» в «Татнефть-Арену» организаторы – кгту пригласили руководство республики, руководителей... |
|
Паспорт учебного кабинета химии (№20) Извлечения из правил по технике безопасности при работе в кабинетах химии средних школ 17 |
|
Рабочая программа по химии в 9 классе на 201 Изучение химии на ступени основного общего образования направлено на достижение следующих целей |
|
Пояснительная записка Настоящая программа разработана на основе Примерных... Использована авторская программа среднего общего образования по химии для базового изучения химии в 10-11 классах по учебнику Г.... |
|
Приказ от 28 ноября 2006 г. N 450 Об утверждении клинико-организационного... ... |
|
Рабочая программа по химии для 10А класса 2 часа в неделю Примерной федеральной программы основного общего образования по химии для 8 – 11 классов |
|
Учебного кабинета химии кабинет №14 Перечень документов для организации Программа курса химии для 8-11 классов общеобразовательных учреждений (автор О. С. Габриелян) |
|
Рабочая программа элективного курса по химии «Решение расчетных задач по химии» (11 класс) Химия. М.: Просвещение, 2008. 56с.), в соответствии с федеральным компонентом государственного стандарта основного общего образования... |
|
Методические указания по лабораторному практикуму «птк асутп аэс» Ознакомление с оборудованием и программным обеспечением асу тп, применяемым на современных аэс россии |
|
Методические указания к практическим занятиям по общей, неорганической... Методические указания к практическим занятиям по общей, неорганической химии и органической предназначены для студентов специальности... |
|
Пояснительная записка рабочая программа составлена на основе: Федерального... Программы «Курса химии для 8–11 классов общеобразовательных учреждений» ( авт. О. С. Габриелян. – М.: Дрофа, 2006) |